[发明专利]具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用

说明书

技术领域

本发明专利涉及分子生物学实验仪器领域，具体地说是具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用。

背景技术

RNA提取纯化是分子生物学研究的基本工作内容，也是转录水平研究的初步工作。由于RNA水解酶（RNase）的广泛存在和难以灭活的顽固本性，使得RNA的抽提纯化和后续工作特别困难。虽然Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使得RNA抽提和纯化变得相对简单，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物学研究中最让人头痛的问题。归根结底，RNA工作的主要问题是防止RNase的污染。RNase无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥当的操作都有可能造成RNase的污染，从而导致整个实验的失败。因此，严格控制实验条件，避免任何可能的RNase污染，是保证实验成功的关键。

跟RNA样品直接接触的仪器EP管和枪头的RNase灭活是极严格的，一般采用焦碳酸二乙酯（DEPC）水溶液浸泡后高温灭菌两次，具体操作如下：一、EP管和枪头用0.1%DEPC水溶液在37℃下浸泡处理12小时。二、两次120℃下高压灭菌30分钟进一步灭活RNas并高温除去残留的DEPC。

RNase灭活现有技术中存在以下三处问题：一、浸泡枪头和EP管时因为枪头和EP管漂浮在DEPC水面上或因为枪头和EP管内空气无法排除而导致DEPC水很难进入枪头和EP管内部，达不到RNase灭活的作用。二、浸泡枪头时枪头散落在容器内，灭菌时需要将枪头逐个放入枪头盒内。枪头数量庞大，并且DEPC有剧毒，为了实验员安全和不污染浸泡过的枪头，常常使用镊子逐个夹取枪头，还需甩出枪头内DEPC水，这样实验员工作强度很大，并有DEPC中毒的风险。三、传统方法未在全密闭的环境下浸泡DEPC水不能重复利用，一般直接倒入下水道，造成试剂浪费且导致环境污染。

发明内容

本发明专利提供了一种高效且具备DEPC隔离功能的RNase灭活仪，其结构包括：DEPC稀释与储备罐（1）（以下简称储备罐）、高压灭菌锅（2）、底座（3）、万向轮（4）、连接阀（5）、电动机（6）、气泵（7）、DEPC加样孔（8）、进水阀（9）、储备罐进水漏斗（10）、搅拌叶（11）、枪头盒架（12）、排水阀（13）、排气阀（14）、灭菌锅顶盖（15）、加热管（16）、离心桶（17）、枪头盒架锁扣（18）、枪头（19）、EP管固定仓挡板（20）、EP管固定仓（21）、枪头档板（22）、枪头盒面板（23）、高压灭菌锅进水漏斗（25）；其中气泵的功能可以被水泵（24）代替。

储备罐和高压灭菌锅安装在带万向轮的底座上，方便移动。万向轮具有锁扣，不移动时避免滑动。连接阀安装在储备罐和高压灭菌锅的下方，控制DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动。整个仪器具有三个电动机分别为搅拌叶（6-1）、气泵（6-2）、离心桶（6-3）提供动力。气泵在电动机正转和反转下实现对储备罐加压和抽气。DEPC加样孔连接在进水管上，具有拧盖，能够密封。离心桶安装在高压灭菌锅内部，底部连接电动机，离心桶内安装有可拆卸的与离心桶成60-85度倾角的枪头盒架，枪头（19）放置在枪头盒自带的枪头盒面板（23）上（RNase灭活后只直接将面板放回枪头盒），枪头盒架能够将面板固定，并锁住出口（18）；枪头盒架上方设有带许多小孔的枪头档板（22），形状如同倒“凹”字形，能够挡住枪头在DEPC水中上浮，金属板的小孔能让DEPC水自由流动进入枪头。枪头盒架在离心桶内均匀分布，以使离心时能够平衡；枪头盒架在离心桶内设置5-15层，每层4-10个，每个枪头盒架能够放置1-3个枪头盒面板。离心桶内的枪头盒架拆卸后可在离心桶内放入EP管固定仓（21），上方放置固定在离心桶内的挡板（20），避免离心时EP管移动；为了离心时能够平衡，EP管固定仓设置成4或8个等大的空间。以上结构除电动机、底座和万向轮外均由不锈钢材料制成。

具备使DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动功能的结构除了气泵对储备罐加压和抽气外，还有一种替代结构是安装在储备罐和高压灭菌锅底部连接管上的水泵，水泵在电动机（6-4）的正转和反转带动下实现使DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间来回流动。