[发明专利]一种用于激活食管癌特异性免疫反应的试剂盒

权利要求书

1.一种用于激活食管癌特异性免疫反应的试剂盒，其特征在于，包括有RPMI-1640培养基、细胞培养上清、GM-CSF、IL-4、INFγ以及食管癌特异性抗原多肽组合；其中，所述细胞培养上清为NK细胞与K562细胞共培养上清或者T细胞培养上清；所述食管癌特异性抗原多肽组合为序列如SEQIDNo.1，SEQIDNo.2，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.9，SEQIDNo.10及SEQIDNo.11的多肽组合。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述NK细胞与K562细胞共培养上清通过将K562细胞与NK细胞按1:2至1:10比例共培养并加入IFNα，24小时后收集培养基上清而获得。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述T细胞培养上清的制备过程中，首先分离外周血单核细胞，淋巴细胞分离液分理单个核细胞，用CD8磁珠分选出CD8+T细胞后，接种至培养基中，加入CD3CD28Beads，24h后加入等量培养基，48h后收集T细胞培养上清。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，利用试剂盒激活食管癌病人肿瘤特异性免疫反应包括以下步骤：

步骤一，分离病人外周血中的单核细胞，细胞短暂贴壁培养之后，移除悬浮细胞，加入诱导剂GM-CSF和IL-4培养两天，培养第3天，第5天更换一半量的培养基，并加入食管癌特异性抗原多肽组合，获得负载有食管癌特异性抗原多肽组合的成熟DC细胞；

步骤二，将所述步骤一中制得的成熟DC细胞用INFγ以及所述的NK细胞与K562细胞共培养上清进一步培养诱导两天，使所述的成熟DC细胞分化为DC1细胞；

步骤三，利用步骤二所获得的DC1细胞进行体内主动诱导和/或体外被动诱导。

5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述NK细胞来源于人类脐带血。

6.根据权利要求1或3所述的试剂盒，其特征在于，所述T细胞培养上清为利用自体或异体T细胞获得。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述步骤三中的体内主动诱导过程为将所述步骤二所获得的DC1细胞回输到病人体内。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述步骤三中的体外被动诱导过程为将所述步骤二所获得的DC1细胞与T细胞混合培养，并再次负载食管癌特异性抗原多肽，然后收集细胞，回输到病人体内。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括有GGT551培养基、DMEM/F12培养基。