[发明专利]一种用于激活胰腺癌特异性免疫反应的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种增强抗癌免疫的试剂盒，尤其涉及一种用于激活胰腺癌特异性免疫反应的试剂盒。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90％为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1％，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。自进入二十一世纪以来，分子生物学与免疫学的长足进步为临床肿瘤治疗提供了新的策略。通过分子生物学的手段已鉴定出大量的肿瘤细胞特异性的抗原，并通过生物信息学的手段分析出其被免疫细胞识别的位点，这为重建患者的肿瘤特异性免疫反应带来的可能。但是最近十年以来的一系列临床试验结果显示，以肿瘤特异性抗原肽为基础的肿瘤疫苗的临床效果令人失望，其中一个重要的原因是抗原提呈过程的缺陷。

XiZhao等人用慢病毒感染的DC细胞使其持续性高表达外源性IL12，发现DC.IL12细胞能够高效的诱导抗原特异性CTL细胞的产生，将DC.IL12与肿瘤抗原肽回输至小鼠体内可显著性的缩小肿瘤肿块。感染空载病毒的DC细胞并不能有效的激发相应的免疫反应，回输后对小鼠的肿瘤大小无显著性的影响。该研究提示了高表达IL12的DC细胞对于肿瘤疫苗发挥其抗癌临床作用的重要性。

DC细胞是哺乳类动物体内具有抗原提呈能力的一类细胞，其主要功能是摄取、加工处理和递呈抗原，激活或调节适应性免疫应答。T细胞因此被激活而生成MHC-I类限制性CD8阳性细胞毒性T细胞(CytotoxicTlymphocyte，CTL)和MHC-Ⅱ类限制性的CD4阳性的一型T辅助细胞(type1Thelper,Th1)。一型极化树突状细胞(Type1PolarizedDendriticcell,DC1)是成熟DC细胞的一类亚群，具有强有力的免疫激活能力。DC1细胞的重要的特征是高表达IL12p70以及免疫激活共刺激分子，可高效的激活抗原特异性的CD8+T细胞和CD4+Th1细胞相关的免疫反应。RobbieB.Mailliard等证实了DC1体外诱导黑色素瘤抗原特异性的CTL细胞的能力可达到正常的成熟DC细胞的40倍以上。AdrianaTLarregina等人还发现DC1细胞诱导B16黑色素瘤抗原特异性CD4+辅助性T细胞，并且促进CD4+辅助性T细胞对肿瘤组织的浸润。因此，高表达IL12的DC1细胞负载肿瘤特异性抗原肽可以为增强抗原肽为基础的肿瘤治疗疗效提供了一种策略，但现有技术中还没有能够相应的、成熟的并适用于激活胰腺癌病人特异性免疫反应的试剂盒。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题提出一种试剂盒用于胰腺癌的临床治疗。体外诱导肿瘤患者自体的DC细胞，获得富集DC1细胞的产物；DC1细胞负载肿瘤特异性肽段组合，可以用于体外或体内的肿瘤抗原特异性的细胞毒性T细胞的诱导。

为了解决上述技术问题，本发明所提供的技术措施为：

本发明提供了一种用于激活胰腺癌特异性免疫反应的试剂盒，包括有RPMI-1640培养基、细胞培养上清、GM-CSF、IL-4、INFγ以及胰腺癌特异性抗原多肽组合；其中，所述细胞培养上清为NK细胞与K562细胞共培养上清或者T细胞培养上清；所述胰腺癌特异性抗原多肽组合包括MAGE-A1-A2、MAGE-A1-A3、MAGE-A3-A2、MAGE-A4-A2/3、PLAC1-A2、hTERT-A2、hTERT-A3、HER2-A2、HER2-A3、Survivin-A2、Survivin-A3、COX-2-A2/3及MTA1-A2抗原多肽，其多肽序列分别如SEQIDNo.1，SEQIDNo.2，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.9，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12及SEQIDNo.13所示。

为了进一步优化上述技术方案，本发明所采取的技术措施还包括：

优选地，NK细胞与K562细胞共培养上清通过将K562细胞与NK细胞按1:2至1:10比例共培养并加入IFNα，24小时后收集培养基上清而获得。

优选地，所述T细胞培养上清的制备过程中，首先分离外周血单核细胞，淋巴细胞分离液分理单个核细胞，用CD8磁珠分选出CD8+T细胞后，接种至培养基中，加入CD3CD28Beads，24h后加入等量培养基，48h后收集T细胞培养上清。