[发明专利]一种制备人源化抗体的核酸分子及其应用

说明书

本发明提供了一种核酸分子，包括了人免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于还包括：人CD79基因序列。本发明克服了人类免疫球蛋白基因在不同物种中由于BCR与Igα和Igβ相互作用不兼容性的问题，同时其表达的人源化抗体无需进行二次改造。

技术领域

本发明属于生物技术领域，主要涉及一种核酸分子及其在人源化抗体制备中的应用。

背景技术

抗体是一类重要的生物医药制品，在人类疾病的预防和治疗过程中发挥了重要的作用。治疗性抗体的发展经历了鼠源抗体、嵌合抗体、改型抗体、表面重塑抗体和全人源化抗体等不同的发展阶段。全人源化抗体(Full Humanized Antibody)，是指经过基因改造或转基因动物免疫而获得的与人源抗体蛋白质序列完全一致的抗体。全人源化抗体由于不含动物蛋白，因此副作用较低，作用效果更好，已成为当前和未来抗体工程的主要研究和发展方向。转基因动物全人源化抗体(Transgenic Humanized Antibody)是指将人类免疫球蛋白基因全部或部分通过转基因或转人工染色体技术，转移至动物基因组中[动物内源的抗体基因缺失(或失活)]，使动物表达人类抗体，从而获得全人源化抗体。

通过体外对人的免疫球蛋白基因进行改造，转入动物体内，再用抗原免疫改造后的动物获得高亲和力的抗体是目前人源化抗体研发的一项重要技术，截止目前，美国FDA已批准7个利用该方法制备的人源化抗体。当前主流的方法是将人类的免疫球蛋白重链和轻链基因替代动物自身的免疫球蛋白重链和轻链基因，使其在动物体内进行重排生成人类的抗体蛋白。但随着研究的深入，发现转入的人类免疫球蛋白基因片段虽然能在动物体内重排和表达，但其产生人抗体蛋白的性能要低于未经基因改造前的动物自身抗体生产效果。以小鼠为例，其原因主要是当抗体在B细胞发育的初级阶段作为B细胞表面受体(BCR)时，其与鼠源的信号蛋白Igα和Igβ的相互作用并不是最优的(即鼠源BCR与鼠源的Igα和Igβ或人BCR与人的Igα和Igβ相互作用效果是最好的)，因此影响了抗体的类型转换、亲和力成熟和B细胞发育为成熟的生产抗体的浆细胞。为克服这一难题，Lee等(Nature biotechnology，2014；32(4)：356-363)将三个人免疫球蛋白基因(IgH，Igκ和Igλ)的可变区替代小鼠的免疫球蛋白可变区，而恒定区使用小鼠免疫球蛋白的相应片段，利用这种策略可克服上述提到的问题，获得可变区为人源，恒定区为鼠源的嵌合抗体，再通过下游的改造将鼠源的恒定区改造为人源的恒定区，得到全人源化抗体。这种方法存在的缺点是需要进行二次改造才能获得全人源化抗体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可在动物体内进行重排表达人源化抗体的核酸分子，该核酸分子克服了人类免疫球蛋白基因在不同物种中由于BCR与Igα和Igβ相互作用不兼容性的问题，同时相对背景技术中提到的Lee采用的方法，其表达的人源化抗体无需进行二次改造。

本发明提供了一种核酸分子，包括了人免疫球蛋白基因或其片段，以及人CD79基因序列。

上述CD79基因序列包括CD79α蛋白肽和CD79β蛋白肽的编码序列。CD79α蛋白肽和CD79β蛋白肽的氨基酸序列分别如SED ID NO.3和SED ID NO.2所示。

上述人CD79基因序列如SED ID NO.1所示。

上述转入的人CD79序列可位于人免疫球蛋白基因载体上或转入小鼠或猪的基因组中。优选的，上述人CD79序列位于人Ig核酸分子两端中的任意一端。所述人CD79序列位于人免疫球蛋白V区的前端或C区后端。

上述核酸分子中CD79基因序列的结构如图1-1所示。CD79在上述核酸分子中位置如图1-2所示。所述核酸分子的结构如图1-3所示。

优选地，上述人免疫球蛋白抗体基因或其片段为人免疫球蛋白抗体重链基因。本发明不需对人免疫球蛋白基因进行内部改造。