[发明专利]一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

目前全球癌症发病形势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势，已经成为严重危害人类健康、导致现代人类死亡的第一大恶疾和顽症。世界卫生组织于2014年2月发布报告,预测全球癌症病例将逐年呈现迅猛增长态势，由2012年的1400万人，逐年递增至2025年的1900万人，到2035年将达到2400万人。该组织统计数据还显示，中国每年新增癌症病例约350万，约有250万人因此死亡。因此寻找有效的抗癌药物已成为当务之急。在抗癌药物研究中，化疗药物的研究和临床应用已取得很大进展。化学合成的抗癌药物如金属配合物铂络合物、有机锗化合物等，虽然具有强抗癌性，但存在毒副作用，水溶性差等缺陷。近年来，中外研究人员逐渐将目光投向资源丰富、纯天然的中草药、民族药，希望从中寻找新的抗癌药物。目前从中草药、民族药中发现了紫杉醇、喜树碱、三尖杉酯碱类、长春新碱、鬼臼毒素、榄香烯乳等一系列天然抗癌药物，并且每年都有多只新品上市。这些天然药物均表现了良好的抗癌活性并在临床上得到了广泛的应用，也日益证明从天然产物中筛选抗肿瘤药物是一个很有前景的方向。

黑果土当归(AraliadumetorumHand.-Mazz)系五加科(Araliaceae)楤木属植物，在云南称“牛角七”，“白九股牛”，“蜜油参”。民间以根入药，入脾、胃二经。中草药，2001，32(9):847-850报道，该植物有补中益气、托毒外出、消炎的功效，用于淋巴腺炎、慢性化脓性骨髓炎和疖痈等症。该属植物化学成分主要含二萜、三萜皂苷、香豆素、黄酮、木脂素及甾醇。该属植物中的二萜类化合物有抗肿瘤、抗炎等活性。本发明试图对黑果土当归中二萜类化合物的抗肿瘤作用做进一步深入研究，以期发现其中的细胞毒活性天然产物，为筛选高效、低毒的抗肿瘤药物提供依据。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种四环二萜类化合物；第二目的在于提供所述四环二萜类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述四环二萜类化合物的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的四环二萜类化合物是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为C₂₀H₃₀O₃，命名为dumetorumaneB，具有下述结构式：

。

本发明的第二目的是这样实现的，是以黑果土当归根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：

A、浸膏提取：将黑果土当归根晾干粉碎得到0.05~0.15cm粒径大小的颗粒，加入黑果土当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74℃下回流提取3~5次，每次1~3h，合并提取液，提取液过滤，减压浓缩提取液至比重为1.1~1.3得到浸膏a；

B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比2~4倍量的水，依次用与水等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶剂进行萃取，每种溶剂萃取4~6次，蒸去溶剂分别得到石油醚萃取物b、乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d；

C、硅胶柱层析：

1）将乙酸乙酯萃取物c上硅胶柱，装柱硅胶为100~200目，用量为萃取物c重量6~8倍量；用体积比为30:1~0:1的氯仿-甲醇有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

2）将1）中以15:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅胶柱，装柱硅胶为200~300目，用量为洗脱液e体积6~8倍量；用体积比25:1~5:1的氯仿甲醇有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC检测，合并相同的部分；

D、高效液相色谱分离：将C步骤2）中以20:1配比的氯仿-甲醇有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化，即得所述的四环二萜类化合物dumetorumaneB。

本发明四环二萜类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和其他波谱技术测定方法确定为四环二萜类化合物，并表征其具体结构为：