[发明专利]金枪鱼的肌红蛋白的提取与纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水生动物体液蛋白提取方法，尤其涉及金枪鱼的肌红蛋白的提取与纯化方法。

背景技术

金枪鱼是一种大型远洋性重要商品食用鱼，金枪鱼的肉色为红色，这是因为金枪鱼的肌肉中含有了大量的肌红蛋白所致。肌红蛋白是一种单体血红素蛋白,存在于一些无脊椎动物的肌肉和大多数脊椎动物的心脏肌和骨骼肌中。在肌肉组织肌浆中肌红蛋白的质量分数约为0.2%～2%，相对分子质量为16000～17000,能可逆地与氧结合,具有转运和储存氧的作用。铁是人体内不可缺少的一种元素，金枪鱼的血合中含有丰富的铁分和维生素B12，易被人体吸收。经常食用，能补充铁分，预防贫血并能作为贫血的辅助治疗食品。

但是现有的专利在金枪鱼血中血红蛋白的提取这方面鲜有报道。本发明旨在发明一种可以在较短的时间内得到金枪鱼的肌红蛋白,且得率高。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术提供一种可在较短时间获得活性好、得率高、纯度高、经济价值高的金枪鱼肌红蛋白的金枪鱼的肌红蛋白的提取与纯化方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：金枪鱼的肌红蛋白的提取与纯化方法，包括采用金枪鱼肉为原料，其中：从金枪鱼肉中提取肌红蛋白；肌红蛋白的提取过程均处于糖类混合物的水溶液状态下进行；糖类混合物含有乳糖和海藻糖，且乳糖与海藻糖重量比为5：1至1：5。通过使用糖类混合物作为保护，特定的混合比例可以取得意想不到的活性保持效果。采用本方法可以获得纯度较高的金枪鱼的血红蛋白，且得率高，有较高的经济价值。

为优化上述技术方案，采取的措施还包括：具有如下步骤：

1）准确称取一定质量金枪鱼碎鱼肉,加入Tris-HCl缓冲液和糖类混合物后进行抽提，过滤后取滤液；

2）将步骤1）滤液于8000-14000r/min离心,除去沉淀,取上清液；

3）将步骤2）上清液用1mol/LNaOH溶液调整pH至7.60,加入适当的饱和度的硫酸铵盐析,静置；

4）将步骤3）盐析后的沉淀物进行8000-14000r/min离心，沉淀加入Tris-HCl提取缓冲液溶解,同一缓冲液中透析10h至24h，使用聚乙二醇经行浓缩；

5）将步骤4）浓缩后的半成品通过离子交换柱经行纯化。通过以上步骤处理后，可以得到纯度较高的产品，具有意想不到的高活性特征。金枪鱼的肌红蛋白提取与纯化的过程均在冰浴中进行。步骤1）中糖类混合物以质量分数计占金枪鱼肉的5-30%。保护试剂在整个提取体系中起到了很好的抗氧化、防变性的作用。纯化处理的条件为：层析材料选用DE-AE-SepharoseFF,0.01mol/LpH8.6Tris-HCl缓冲液与200mmol/L的NaCl溶液做梯度洗脱,收集洗脱液。采用层析纯化后可以得到纯度极高的产品，用于特定用途，具有很高的经济价值。透析处理截取分子量为2000至100000。该分子量区间内的活性物质取得率较高。

由于本发明采用了从金枪鱼肉中提取肌红蛋白；肌红蛋白的提取过程均处于糖类混合物的水溶液状态下进行；糖类混合物含有乳糖和海藻糖，且乳糖与海藻糖重量比为5：1至1：5。通过使用糖类混合物作为保护，特定的混合比例可以取得意想不到的活性保持效果。采用本方法可以获得纯度较高的金枪鱼的血红蛋白，且得率高，有较高的经济价值。因而本发明具有可在较短时间获得活性好、得率高、纯度高、经济价值高的金枪鱼肌红蛋白的优点。

附图说明

图1为本发明实施例血红蛋白的标准曲线。

具体实施方式

以下结合附实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例：金枪鱼的肌红蛋白的提取与纯化方法，包括采用金枪鱼肉为原料，其中：从金枪鱼肉中提取肌红蛋白；肌红蛋白的提取过程均处于糖类混合物的水溶液状态下进行；糖类混合物含有乳糖和海藻糖，且乳糖与海藻糖重量比为5：1至1：5。通过使用糖类混合物作为保护，特定的混合比例可以取得意想不到的活性保持效果。采用本方法可以获得纯度较高的金枪鱼的血红蛋白，且得率高，有较高的经济价值。包括如下步骤：

1）准确称取一定质量金枪鱼碎鱼肉,加入Tris-HCl缓冲液和糖类混合物后进行抽提，过滤后取滤液；

2）将步骤1）滤液于8000-14000r/min离心,除去沉淀,取上清液；

3）将步骤2）上清液用1mol/LNaOH溶液调整pH至7.60,加入适当的饱和度的硫酸铵盐析,静置；