[发明专利]一种蛋白酶抑制剂cystatin及其免疫抑制作用

说明书

本发明公开了一种蛋白酶抑制剂cystatin及其免疫抑制作用，所述蛋白酶抑制剂cystatin来源于森林革蜱中，所述蛋白酶抑制剂cystatin对组织蛋白酶L有明显的抑制活性，能显著抑制巨噬细胞和树突状细胞的活化，能显著抑制抗原递呈和炎性细胞因子的表达，是一个具有应用前景的免疫抑制分子。

技术领域

本发明涉及生物医药应用领域，特别是涉及一种蛋白酶抑制剂cystatin及其免疫抑制作用。

背景技术

半胱氨酸组织蛋白酶cathepsin是各种动物组织的细胞内（特别是溶酶体中）发现的一类蛋白酶，由组织蛋白酶A、B、C、D、E、L等多种酶组成。在免疫细胞中，组织蛋白酶参与对抗原的降解、加工和递呈，是启动免疫应答的关键蛋白酶。近年来的研究还表明，组织蛋白酶还参与细胞内其他的一些重要生理和病理过程，比如细胞凋亡、蛋白质加工、肿瘤发生、炎症以及神经退行性疾病等。

Cystatin蛋白家族是组织蛋白酶cathepsin的一类重要的抑制剂。它们调节细胞内组织蛋白酶的功能，对维持细胞内蛋白质的稳态起着重要作用。鉴于组织蛋白酶cathepsin家族在细胞免疫应答及众多疾病进程中的重要作用，其抑制剂Cystatin在免疫调节中的作用也越来越受到重视。例如Cystatin C是半胱氨酸组织蛋白酶B、H、L和S的最有效抑制剂，在树突状细胞和巨噬细胞中发挥重要调节作用。胞外的Cystatin C能够被其他细胞摄取，进入溶酶体，抑制溶酶体中组织蛋白酶的活性。Cystatin C被证明在抗原递呈细胞中调节MHC-II类分子的加工和成熟，从而影响抗原的递呈。胞内Cystatin C的水平还与DC的活化程度和细胞因子的表达水平相关，提示Cystatin活性影响着DC的成熟。在巨噬细胞中，Cystatin B和C被证明影响活化的巨噬细胞产生一氧化氮，而且这个功能不依赖于Cystatin的蛋白酶抑制活性，提示Cystatin对炎症调节的新机制。Cystatin F高表达于CD56dimCD16⁺的NK细胞亚群中，调节NK细胞参与炎症部位的免疫反应和细胞杀伤。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种蛋白酶抑制剂cystatin及其免疫抑制作用，其制备成本低，分子量小，性质稳定，吸收容易，具有强烈的抑制作用。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种蛋白酶抑制剂cystatin，所述蛋白酶抑制剂cystatin的基因序列为：

ATGGCTCACAGGGCAGGTATTATTGCAGTTCTCACAGCGCTGGTCGCTGTAACCCTTGCAATTCCTGGAGGCTGGTCGACGAAGGAGCCCTCATCCAGCCCCAAGTACAAAGAACTGGCCCACTTCGCTGTCGCTCAGCGCGTTGAAGGTCTGCAAAAGTACGACACAGTTCTCGAACTCACAAAGGTGGAGACTCAGGTCGTTGCTGGCGTTAACTACCGCCTAACCTTCACCATTGCCGGATCCGATTGCACAATAGGTGAAGTTGAGTACAATGCTGAACGTTGCCCGGCGAAGGATAATCAGGCAAAGGCAACCTGCACTGCGGTGGTCTACGAGAGGCCCTGGGAAAACGTGCGATCCCTCACTTCCCTCAACTGCGCTTGA。

在本发明一个较佳实施例中，所述蛋白酶抑制剂cystatin来源于森林革蜱中。

在本发明一个较佳实施例中，所述蛋白酶抑制剂cystatin的克隆和蛋白表达过程为：（1）克隆cystatin基因到原核表达载体pGEX-6P-2中；（2）大肠杆菌重组表达cystatin；（3）柱层析的方法纯化重组的cystatin蛋白。