[发明专利]一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金层析技术检测人体尿液中HIV1/2抗体的试纸及其制备方法。

背景技术

艾滋病感染呈逐年上升趋势，国务院强调了“扩大艾滋检测服务范围，推广使用快速、简便的检测方法，提高检测可及性”，从而有效防治艾滋病。在避免职业暴露风险的同时进一步扩大检测覆盖面，简便、无创、安全、有效的艾滋自检试剂已成为大势所趋。

感染HIV病毒的各期病人尿液中含有抗HIV病毒的特异性抗体，尿液中抗体浓度与血清中的抗体水平相一致，且尿液具有采样方便、无创、无感染性等优点。因此，以尿液代替血液检测HIV抗体逐渐成为HIV检测的一种全新手段。

国内外陆续开发出尿检HIV-1抗体酶联免疫吸附(ELISA)及蛋白免疫印迹(WesternBlot)等检测试剂，其灵敏度和特异性与HIV血检试剂相当，但其检测成本较高，且需特殊的实验条件，不适于大规模推广。

简便快速的HIV尿检试剂成为人们研究的新方向，由于尿液中抗体含量低，仅为血液的千分之一甚至万分之一，对尿检试剂的灵敏度提出了更高的要求。

选用高灵敏度的检测方法，或通过改进工艺从而提高检测的准确性，以及简便、快速检测和降低成本是艾滋病尿检试剂发展的要求和方向。

发明内容

本发明开发了一项新的HIV测试技术，即一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸，该技术接合了现有的各种技术，可以进行快速尿液测试，用受试者更能接受的、简单的、非侵入式的、安全的、快速和准确的测试方法代替传统的血液测试方法，将有利于识别更多的HIV感染者，从而实现早发现、早治疗、准确以及安全的非侵入式标本采集，增强国家控制和监测HIV感染的能力。

本发明目的之一在于提供一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸。

本发明目的之二在于提供一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸的制备方法。

一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸，包括硝酸纤维素包被膜(1)、胶体金结合物垫(4)、样品垫(5)、吸水垫(6)，它们依次粘贴在底板上，其特征在于：

所述的硝酸纤维素包被膜(1)上有检测线(2)和质控线(3)，

一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸条的制备方法，该试纸由样品垫、金包被的聚酯膜、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫共同组成，其特征在于该方法包括有以下步骤：

步骤1，抗原的制备：选用纯化的基因工程表达的HIV1/2病毒重组抗原，

以及包被的硝酸纤维素膜的制备：用包被基础液稀释抗原至浓度分别为们0.6-1.76mg/ml和0.2mg/ml，喷在硝酸纤维素膜上干燥18～20小时，密封装在有干燥剂的铝箔袋内贴板用。

以及金包被的聚酯膜垫的制备：用金结合物悬浮液复溶(溶液1)，将金结合物吸收值调整到30-34，继续检测三次吸收值。用0.22ul的微孔滤膜过滤，贴标签2～8℃保存待用。

溶液1的制备：量取1200ml纯化水于干净玻璃容器中，在加热搅拌器上加热，沸腾前量取纯化水溶解已称取比例为0.00035g/ml的柠檬酸钠。完全沸腾后小档搅拌下加入比例0.0045的4％的氯金酸，取小样检测，要求在520-525nm波长范围内，最大吸光值为1.70到2.30。将已合格的胶体金调节PH至6.0～7.0，小档搅拌下加入蛋白A溶液1.5～1.8ml，至少搅拌20～30分钟，检测吸收峰，吸收值。加入10％的BSA继续搅拌至少30分钟，检测吸收峰和吸收值。在5℃～15℃低温条件下，8000-10000rpm/min离心50～60分钟，小心吸取上清，尽量吸干上清。

以及胶体金包被结合物的制备：精确量取胶体金结合物，加入蔗糖使之含量为20％和海藻糖使之含量为5％，轻轻倒置混匀，包被开始前加入10％UHP(15ul/ml)轻轻倒置混匀。以0.7ul/mm的包被量，使用轴对轴Accuflow包被机包被。50℃2h±15min干燥后密封到含干燥剂的铝箔袋中，储存在干燥罐中。

以及样品垫的制备，是经处理液浸渍处理的玻璃纤维膜，于37℃烘干后备用；

步骤2，在底板上顺次相互搭接粘贴经前述步骤1所制作完成的样品垫、金包被的聚酯膜、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫；

步骤3，对步骤2所制作完成的材料，切割成试纸条。

所述的步骤3中，切割成的试制条的宽度优选为≥3.5mm。