[发明专利]一种用于宫颈癌早期筛查的分子标记和检测引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于宫颈癌早期筛查的分子标记和检测引物，属于分子生物学和医学领域。

背景技术

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，全球每年新发病例约为528,000例，死亡病例约有266,000例，其中约85％发生在发展中国家。中国的发病率居高不下，为7.5/100,000，死亡率为3.4/100,000。在一些缺乏合理筛查的落后地区，发病率甚至高达81/100,000。初步估计，至2030年，每年死于宫颈癌的患者约有474,000例，其中超过95％可能发生于落后及发展中国家。因此，寻找宫颈癌早期筛查的分子标记，筛查出宫颈癌前病变以及肿瘤患者，实施有效的早诊、早治具有重要意义。

目前，我国采用的是以宫颈液基细胞学为主要内容的宫颈癌筛查策略，同时局部采用HPV-DNA+细胞学联合筛查。我国尚未建立完善的国家筛查体系，而且由于筛查的不平衡性(地域经济、医疗资源、公众认知等影响因素)，导致目前筛查缺乏与筛查过度并存、不规范治疗与过度治疗并存。宫颈液基细胞学存在1、单一应用敏感性不高(约为50％-85％)；2、ASCUS及LSIL的特异性不高；3、取材、制片、阅片水平的参差不齐，缺乏规范化的质量控制等缺陷。因此单一依赖细胞学检查容易造成假阴性，漏检率高。HPV-DNA检测能够显著提高灵敏度，但往往可能检出一过性HPV感染，而不是具有致病性高危型HPV持续感染。因此单一依靠HPV筛查，会造成过度诊断和过度治疗。

DNA甲基化是一个重要的表观遗传学机制。DNA甲基化，即未甲基化胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(Cytosine-phosphate-Guanosine,CpG)二核苷酸发生甲基化，是肿瘤抑制基因失活的关键机制之一。肿瘤抑制基因(TumorSuppressorGenes，TSG)发生丢失、突变、甲基化等变化导致正常功能丧失时，细胞的增殖失控形成恶性肿瘤。现已明确DNA甲基化是TSG失活的三种机制之一，且在某些情况下可能是唯一的机制。因而DNA甲基化在癌症发生发展中发挥重要作用。作为癌症发生的早期事件，DNA异常甲基化检测可以在患者出现临床表现或者影像学证据之前做到分子诊断，为癌症早期诊断提供新的途径。

国内外研究者利用肿瘤抑制基因甲基化检测，已经在宫颈癌早期筛查的研究中取得了令人振奋的进步，但是同一基因在不同研究之间存在较大差异，分析其原因可能为：1、基因甲基化位点的特异性；2、基因遗传背景的差异性；3、操作方法和实验试剂的异质性。因此，本领域急需进一步发现更有效更稳定更易应用于临床的宫颈癌特异性的甲基化早期筛查的生物标记物。

发明内容

针对上述研究进展和现有技术，本申请的发明人经过检索和查阅大量文献以及对TheCancerGenomeAtlas(TCGA)平台的数据分析，优选出数个候选基因的多个位点，其中多个为从未报道过的位点。通过测定、验证和分析，首次发现JAM3基因的M4位点随宫颈病变程度的加重甲基化的程度逐渐升高，可作为宫颈癌早期筛查的分子标记，因此，本发明提供了一种用于宫颈癌早期筛查的分子标记和检测引物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于宫颈癌早期筛查的分子标记，JAM3-M4，CADM1-M2，CADM1-M8，DAPK1-M2或DAPK1-M3，核苷酸序列分别为：

JAM3-M4:CGCAGCCAGGGCTGGGACTCGGGCCTGGCTAGGGCGGGGGCCCTGGGACGCCCGGCAGTTGGACCGGGGCGGGGAGCTAATTTGGGATGGGGGGCCCGTCCCAGGCAGTGAGTCGGTCCCGGACAGCCGTCGGACCCC(SEQIDNO:1)，

CADM1-M2:GTCCTCCGCCACTTGTTGCTCCCGGGTCCTGCAGCTCTGGAGCTGCAAGGAGGGGCTTTGCAGGCTCAGAGCCCTGCTGCATCCCCTCCTGCATCGCCGCTCGCACCCCGCGGCCCC(SEQIDNO:2)，

CADM1-M8:GCCGCCGCACACTGGGATCCGCTCGGCAGCACTACACTCGCCATGTCGGGCACCTGCCTCAGACTGGCGGCGTTGGCTGCCTCCGGAGCCCGAGCGGACAGCTAATGAGA(SEQIDNO:3)，