[发明专利]一株拮抗四种镰孢属真菌的内生青霉菌及其应用

说明书

本发明涉及一株拮抗四种镰孢属真菌的内生青霉菌及其应用，本发明从连作平邑甜茶的健康根系中经人工分离、筛选得到一株内生草酸青霉菌A1。本发明的菌株，生长速度快，孢子大量繁殖，能够在短时间内占据大部分的生存空间，对引起苹果连作障碍的主要有害菌(腐皮、层出、串珠和尖孢)—镰孢菌有较强的拮抗作用，对串珠镰孢菌的抑制率最高，在玉米培养基上抑制率达到80％以上，并对根皮苷有一定的降解作用，为苹果连作障碍的生物防控提供了理论依据和技术基础。

(一)技术领域

本发明涉及一株拮抗四种镰孢属真菌的内生青霉菌及其应用，属于果树栽培领域。

(二)背景技术

苹果连作障碍由来已久，病因复杂。在多数地区，与土传真菌有关的生物因素是造成连作障碍的主要原因。已报道与苹果连作障碍有关的主要致病真菌属有镰孢属、柱孢属、立枯丝核属、疫霉属和腐霉属等。不同地区、不同果园连作土壤中的致病真菌不同，有研究认为镰孢菌属真菌是引起苹果连作障碍的主要病原之一。Van Schoor研究发现在南非所有连作苹果园中土壤有害真菌镰孢属、柱孢属以及腐霉属是引起连作障碍的主要原因。

轮作、土壤化学消毒(如溴甲烷)等措施曾被用来防控苹果连作障碍。轮作是目前防控苹果连作障碍效果最好的措施之一，缺点是耗时太长，一般轮作时间不能低于三年，生产中不易推广。溴甲烷等化学熏蒸剂污染环境且对人体有害，已被禁止使用，而生物防控是利用有益菌抑制土壤中真菌的数量或干扰真菌对寄土植物侵染的一种环保型防治方法，对苹果连作障碍进行生物防治是一种前景广阔的技术措施。Shin等研究认为青霉菌可产生大量生物活性成分并对真菌，植物线虫等的生长发育可能有不同程度的抑制作用，且青霉菌Penicillium simplicissimum IFM53375.中分得的Penicillide(1-4)类化合物及其衍生物具有抗真菌活性作用，同时青霉菌分泌的青霉素对根皮苷有降解作用，而在苹果连作障碍中生防青霉菌的相关研究未见报道。

(三)发明内容

为了解决上述问题，本发明涉及一株拮抗四种镰孢属真菌的内生青霉菌及其应用；本发明从连作平邑甜茶健康根系内部分离到一株具有生防功能的内生青霉菌，通过与串珠、腐皮、尖孢和层出病原镰孢菌的对峙试验探讨其生防机理，用于苹果连作障碍的防控，具有重要的理论和实践意义。

本发明首先分离得到一株内生青霉菌。

一株拮抗四种镰孢属真菌的内生青霉菌，来源于连作平邑甜茶的健康根系，经人工分离、筛选得到。该菌株鉴定为草酸青霉(Penicillium oxalicum)，命名为内生草酸青霉A1，菌落平坦，菌丝初为白色后逐渐变为暗绿色，分生孢子梗顶端形成扫帚状的分枝，分生孢子椭圆形，光滑。

一株内生草酸青霉A1(Penicillium oxalicum)，已于2015年7月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名：A1；保藏号：CGMCC No.11111；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所；邮编:100101。

本发明还对内生草酸青霉A1的功能进行了验证：一方面提供了内生草酸青霉A1在PDA和玉米粉培养基上与腐皮、层出、串珠和尖孢镰孢菌的对峙试验结果，说明内生草酸青霉A1对引起苹果连作障碍的主要镰孢属真菌(腐皮、层出、串珠和尖孢)有明显的拮抗作用；另一方面提供了内生草酸青霉A1对根皮苷的降解效果，说明内生草酸青霉A1可减轻由根皮苷引起的苹果连作障碍。

本发明分离得到的内生草酸青霉A1，生长速度快，孢子大量繁殖，能够在很短的时间内占据大部分的生存空间，对引起苹果连作障碍(腐皮、层出、串珠和尖孢)镰孢菌真菌有很强的拮抗作用，并对根皮苷有一定的降解作用，为苹果连作障碍的生物防控提供了理论依据和技术基础。

(四)附图说明

图1为内生草酸青霉A1在PDA和CA培养基上的形态特征观察；