[发明专利]一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液及其制备方法。

背景技术

鸡传染性支气管炎（IB），是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性疾病，以气管罗音、咳嗽、打喷嚏为主要特征，是危害养鸡业的主要疫病之一。鸡传染性支气管炎的血清型众多，目前已报道的血清型有30余种，不同血清型毒株在毒力、致病性和组织嗜性上存在着很大差异，相互间没有或仅有部分交叉免疫性，同时新的血清型不断出现，给IBV的预防带来了诸多困难。

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法。其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体，多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低，而且可以选择不同的日龄和接种途径，病毒在鸡胚中易于增殖，部分病毒感染鸡胚以后可以产生豆瓣，引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒，容易采集和处理，而且来源充足，设备和操作简便易行。

当前国内生产的鸡传染性支气管炎基本都是采用鸡胚接种病毒后进行增殖，收获尿囊液制备而成。研究表明，鸡胚日龄和种毒接种量与收获时的鸡胚尿囊液量呈负相关。即随着接种鸡胚日龄的增加和种毒接种量的提高，收获的鸡胚尿囊液会减少。通常选用10日龄鸡胚进行新城疫病毒接种培养繁殖，一般在培养96～120小时收获鸡胚液，即14～15日龄，此时日龄偏大，尿囊液含量不高（鸡胚发育的13～14日龄尿囊液含量最高）；若提高尿囊液含量必须提前收获，但此时病毒含量并未达到峰值，造成毒价降低同样得不偿失。另外日龄越低鸡胚的组织分化程度越低，越有利于病毒的增殖，但按通常手段采用低日龄（如9日龄）鸡胚进行病毒的接种培养，因鸡胚抵抗力差，过早死亡等导致鸡胚尿囊液中病毒毒价较低，尿囊液含量也较低。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液及其制备方法的技术方案。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：氨基酸组合1～4g、维生素组合1～5g、亚硒酸钠12～18mg和复方中药多糖5～25g，所述的氨基酸组合包括蛋氨酸、色氨酸、酪氨酸和亮氨酸，所述的维生素组合包括维生素B2、维生素D和维生素E，所述的复方中药多糖由仙茅、杜仲、茯苓和续断提取得到。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于稀释液的pH为6.6～7。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于所述的磷酸缓冲液由氯化钠6～10g，氯化钾0.05～0.5g，磷酸氢二钠1～1.2g，磷酸二氢钾0.05～0.5g，氯化钙0.05～0.2g，含6个结晶水的氯化镁0.05～0.2g溶于1000ml双蒸水中得到。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于所述的每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：氨基酸组合2～3g、维生素组合2～4g、亚硒酸钠14～16mg和复方中药多糖10～20g。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于所述的氨基酸组合包括以下重量百分比的氨基酸：蛋氨酸20～30%、色氨酸20～40%、酪氨酸10～30%，亮氨酸10～30%，优选为蛋氨酸25～30%、色氨酸25～35%、酪氨酸15～25%，亮氨酸15～25%。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于所述的维生素组合包括以下重量百分比的维生素：维生素B215～40%、维生素D20～50%和维生素E20～40%，优选为维生素B220～35%、维生素D30～45%和维生素E30～35%。

所述的一种鸡传染性支气管炎病毒稀释液，其特征在于所述的复方中药多糖按以下步骤制得：

a、按仙茅10～30份、杜仲10～20份、茯苓20～40份和断续5～20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将b中上清进行醇沉，沉淀得到粗制中药多糖；

d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；