[发明专利]一种抗VEGF-抗PD-1双功能抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗VEGF‑抗PD‑1双功能抗体及其应用，属于分子免疫学技术领域。本发明所提供的抗VEGF‑抗PD‑1双功能抗体包含轻链和重链，其中，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示。同时，本发明还提供了编码双功能抗体的基因以及双功能抗体的应用。本发明所提供的双功能抗体能够与PD‑1和VEGF结合，具有很高的亲和力，同时能够有效的刺激T细胞分泌IL2和诱导T细胞分泌IFN‑γ，并能显著抑制小鼠肿瘤生长，在制备抗肿瘤的药物中的应用具有巨大的潜力。

技术领域

本发明涉及一种抗VEGF-抗PD-1双功能抗体及其应用，属于分子免疫学技术领域。

背景技术

据WHO专家预测，到2020年，全球人口的肿瘤发病人数将达到2000万人，死亡人数将达到1200万人，因此，肿瘤将成为本世纪人类第一大杀手，对人类生存构成最严重的威胁。随着中国人口老龄化，患肿瘤疾病的人口会越来越多，因此开发抗肿瘤药物也成为国家健康事业的重点。

血管内皮生长因子，又叫VEGF。VEGF蛋白是于1989年由美国的两间生物科技公司的科学家分别成功纯化与鉴定，并克隆与测定了其基因序列，证明VPF与VEGF是同一基因编码的同一蛋白。VEGF有六个等型(isoforms)：VEGF-A,-B,-C,-D,及-E；其分子量从35至44kDa不等，每个等型特异性地与三个“血管内皮生长因子受体”(VEGFR-1,-2,及-3)的特定组合相结合。VEGF是高度保守的同源二聚体糖蛋白。二条分子量各为24kDa的单链以二硫键组成二聚体。VEGF分解的单体无活性,去除N 2糖基对生物效应无影响,但可能在细胞分泌中起作用。由于mRNA不同的剪切方式，产生出分别VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF185、VEGF206等至少5种蛋白形式，其中VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，能直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮细胞增殖，增加血管通透性。1990年，美国哈佛大学Folkman博士提出著名的Folkman理论，即肿瘤组织生长，必须依靠新生血管生成来提供足够的氧气和营养物质来维持。被认为是VEGF临床应用的基础。抗VEGF与VEGFR结合的单克隆抗体，可抑制血管内皮生长因子，用于治疗各类转移性癌症。

程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)为CD28超家族成员。PD-1表达于活化的T细胞，B细胞及髓系细胞，其有两个配体，即程序性死亡配体-1(programmed deathligand 1,PD-L1)和PD-L2。PD-L1/L2在抗原递呈细胞都表达，PD-L1在多种组织也有表达。PD-1与PD-L1的结合介导T细胞活化的共抑制信号，调节T细胞活化和增殖，起到类似于CTLA-4的负调节作用。华裔科学家陈列平实验室首先发现PD-L1在肿瘤组织高表达，而且调节肿瘤浸润CD8T细胞的功能。因此，以PD-1/PD-L1为靶点的免疫调节对抗肿瘤有重要的意义。近年来，已有多种Anti-PD-1/PD-L1抗体在肿瘤免疫治疗的临床研究迅速开展。目前Pembrolizumab和Nivolumab已被FDA批准用于晚期黑色素瘤，最近Nivolumab也已被美国FDA批准用于晚期鳞状非小细胞肺癌的治疗。另外，MPDL3280A(anti-PD-L1单抗)，Avelumab(anti-PD-L1单抗)等也已进入多个晚期临床研究中，覆盖非小细胞癌，黑色素瘤，膀胱癌等多个瘤种。由于PD-1抗体的广谱抗肿瘤前景和惊人的药效，业界普遍认为针对PD-1通路的抗体将带来治疗多种肿瘤治疗的突破性的进展：用于治疗非小细胞性肺癌，肾细胞癌，卵巢癌，黑色素瘤，白血病以及贫血病等等。在2012年和2013年的美国癌症协会(AACR)年会以及美国临床肿瘤协会(ASCO)年会上揭晓的关于PD-1抗体药物的临床药效数据后，PD-1抗体成为全球制药行业最炙手可热的在研抗体药物。