[发明专利]一种鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法。

背景技术

新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)引起的一种烈性病毒性传染病，是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一，也是我国所有鸡病中危害最大的一种，被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病。

鸡传染性支气管炎（IB），是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性疾病，以气管罗音、咳嗽、打喷嚏为主要特征，是危害养鸡业的主要疫病之一。鸡传染性支气管炎的血清型众多，目前已报道的血清型有30余种，不同血清型毒株在毒力、致病性和组织嗜性上存在着很大差异，相互间没有或仅有部分交叉免疫性，同时新的血清型不断出现，给IBV的预防带来了诸多困难。

二联疫苗的制备，可以一针防治两种传染病，同时可以解决使用多种疫苗分次免疫，造成的鸡群的其它的不良反应，简化免疫程序，降低投入的成本。

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法。其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体，多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低，而且可以选择不同的日龄和接种途径，病毒在鸡胚中易于增殖，部分病毒感染鸡胚以后可以产生豆瓣，引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒，容易采集和处理，而且来源充足，设备和操作简便易行。

当前国内生产的新城疫、鸡传染性支气管炎疫苗基本都是采用鸡胚接种病毒后进行增殖，收获尿囊液制备而成。传统的二联疫苗均由单一疫苗分别生产后混合在一起制成二联疫苗，该工艺费时费力，生产成本较高。同胚培养是近年来兽用生物制品行业提出的生产工艺，即将两种病毒以合适的比例混合后同时接种到鸡胚中进行增殖，该工艺减少了生产工艺环节，缩短的生产周期，减少人力物力投入，大大降低了生产成本。但是截至到目前为止同胚培养的工艺仍存在缺陷，培养过程中由于病毒之间的互相干扰，两种病毒的含量均不稳定，批次间差异较大，困扰着该品种的生产，严重影响了后期疫苗的品质。

氨基酸，是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。维生素是维持机体生命活动必须的一类有机物质，也是保持机体健康的重要活性物质。维生素是酶的辅酶或者是辅酶的组成分子，维生素是维持和调节机体正常代谢的重要物质。在体内硒和维生素E协同，能够保护细胞膜，防止不饱和脂肪酸的氧化。

多糖是中药活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的能力。但是中药多糖的作用并不具有广谱性，同常某种或某几种多糖协同作用具有特异性的活性作用。

本发明基于上述技术背景，提出一种同胚培养的方法，具体是一种特别适用于鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法，解决了新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒同胚培养稳定性差、批次间差异大的培养难题，提高了两种病毒的稳定性、收获量和病毒滴度。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法的技术方案，通过该方法，可同时提高两种病毒的稳定性、收获量和病毒滴度。

所述的一种鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法，其特征在于采用鸡新城疫病毒稀释液稀释新城疫病毒至1000-5000倍，用鸡传染性支气管炎病毒稀释液稀释鸡支气管炎病毒至5000-10000倍，分别在4℃孵育30-60分钟后按1:1比例混合均匀，接种9-10日龄鸡胚，0.1-0.15ml/胚，36-37℃继续培养至96小时，弃去48小时前死亡鸡胚，收获48-96小时死活胚液，既得鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒混合病毒液。

所述的一种鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚培养的方法，其特征在于所述的鸡新城疫病毒稀释液为每1000ml磷酸缓冲液中含有以下重量配比的组分：氨基酸组合3～5g、维生素组合6～10g、亚硒酸钠0～10mg和复方中药多糖30～100g。