[发明专利]骨髓间充质干细胞的保存试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞保存液技术领域，具体涉及一种骨髓间充质干细胞的保存试剂及其应用。

背景技术

干细胞治疗是将具有不断自我繁殖能力和多向化潜能的干细胞在体外培养后，再将其移植入患者受损或缺损组织，从而实现对损伤组织的补充和修复。而目前能实现人骨髓间充质干细胞分离并大规模培养的细胞很少，在细胞培养完成之后，同时还需要对细胞进行表型检测、细胞形状分析等等，之后将细胞保存在保存液中，待需要时再进行输注。在人骨髓间充质干细胞培养后进行保存的阶段中，既要维持细胞的基本生命代谢以防止其死亡，同时又要避免其代谢量过大而继续大量增殖产生的大量形状变异。所以细胞保存中，都采用0.9WT％氯化钠注射液、5WT％葡萄糖注射液、复方电解质注射液(PlasmalyteA)、1～5WT％人血白蛋白溶液等作为细胞的保存介质来进行。

但是细胞保存的过程中，采用上述MSCs的保存液进行保存，在需要保存时间较短时(4h以内)细胞的性质和变化还能维持在比较正常的水平，细胞活性降低的程度还不会大幅降低治疗的品质。但是如果保存的时间上进一步增加，进行稍长时间的保存时，首先细胞具有表型异变、活性降低、聚集成团等倾向和性状变化更加明显，这些都会降低细胞的品质影响治疗的效果；而上述保存液本身不具有缓解或者降低这些保存过程中问题的能力，进行保存之后细胞活性大大降低，慢慢转向于休眠或者凋亡。

发明内容

本发明实施的目的在于克服现有的缺陷，提供一种能在骨髓间充质干细胞保存中维持其细胞代谢状态和活性的保存试剂。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种骨髓间充质干细胞的保存试剂，包括0～100mmol/L的葡萄糖、40～50mmol/L的甘露醇、24～28mmol/L的磷酸氢二钾、12～16mmol/L的磷酸二氢钾、3～4mmol/L的腺嘌呤、1～1.5mmol/L的肌苷、14～18mmol/L枸橼酸钾、35～45mmol/L的氯化铵、75～80mmol/L的氯化钠及细胞抗氧化剂。

本发明的上述骨髓间充质干细胞的保存试剂，通过葡萄糖、枸橼酸钾少数几种营养维持细胞基本生命代谢，同时不添加大量丰富的营养避免其大量快速代谢和增殖；并且进一步辅助腺嘌呤、肌苷、甘露醇维持细胞自身的形态和性状，保护细胞膜和酶活性的目的，使保存的过程中细胞活性不发生退化；最后以细胞抗氧化剂抑制细胞的氧化损伤，相比现有通常的保存液，保存后细胞具有更好的活性和品质。

在本发明的上述骨髓间充质干细胞的保存试剂的基础上，本发明进一步还提出其在骨髓间充质干细胞保存中的应用。采用上述保存试剂保存骨髓间充质干细胞，在保存中保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能；并尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质，同时还维持细胞的形态抑制和分化和损伤，相比现有通常的保存液保存后细胞具有更好的活性和形态。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实例提出一种骨髓间充质干细胞的保存试剂，该保存试剂成分包括有80～100mmol/L的葡萄糖、40～50mmol/L的甘露醇、24～28mmol/L的磷酸氢二钾、12～16mmol/L的磷酸二氢钾、3～4mmol/L的腺嘌呤、1～1.5mmol/L的肌苷、14～18mmol/L枸橼酸钾、35～45mmol/L的氯化铵、75～80mmol/L的氯化钠及细胞抗氧化剂。

本发明的上述骨髓间充质干细胞的保存试剂，是基于维持细胞基本代谢活性的同时，一方面是保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能；二是尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质；并且辅助修复成分，降低保存过程中的细胞损伤。

其中，细胞抗氧化剂比较中重要的补充性的细胞损伤修复和抑制工程成分，是能清除自由基和抑制自由基活动的物质，能够预防自由基的形成，或是在自由基形成之后防止它们与其他的细胞分子结合，从而阻止自由基造成细胞的衰老和氧化损伤。在实施中，上述细胞氧化剂可以采用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素C、维生素E及还原型谷胱甘肽中的一种或多种。