[发明专利]一种D‑二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片

说明书

技术领域

本发明涉及免疫体外诊断领域，具体涉及一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，能够在短时间内实现对生物样品中D-二聚体的定量检测，具有操作简单，灵敏度高，低成本等特点。

技术背景

纤维蛋白溶解系统(fibrinolysis system)是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原(plasmingen)、纤溶酶原激活剂(plasmingen activator，如t-PA，u-PA)、纤溶酶(plasmin)、纤溶酶抑制物(plasmin activator inhibitor，PAI-1，antiplasmin)。当纤维蛋白凝结块(fibrin clot)形成时，在tPA的存在下，纤溶酶原激活转化为纤溶酶，纤维蛋白溶解过程开始，纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段，形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由下列物质：X-寡聚体(X-oligomer)、D-二聚体(D-Dimer)、中间片段(Intermediate fragments)、片段E(Fragment E)组成。其中，X-寡聚体和D-聚体均含D-二聚体单位。

纤溶蛋白降解产物中，唯D-二聚体交联碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。在生理状态下，人体正常D-二聚体的水平一般在200μg/L以下，机体保持着凝血与纤溶动态平衡，以保证纤维蛋白及时形成和及时清除。心肌梗死、脑梗死、肺栓塞、静脉血栓形成、手术、肿瘤、弥漫性血管内凝血、感染及组织坏死等均可导致D-二聚体升高。因此，理论上，D-二聚体的定量检测可反映药物的溶栓效果、也可用于诊断、筛选新形成的血栓。

目前，用于D-二聚体的定量检测方法中应用较多的主要为：酶联免疫吸附法(ELISA)、乳胶颗粒凝集法(LATEX)、免疫过滤胶体金染色法、双抗体RBC凝集法和放免法等。临床最常用是：ELISA、LATEX和免疫过滤胶体金染色法，其中LATEX法测定速度快，但敏感度不如ELISA法；ELISA法敏感度高，但检测时耗时较长。中国专利(201110051367.2)公开了一种D-二聚体时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法，该试剂盒由下述成分组成：1)D-二聚体校准品；2)D-二聚体单克隆抗体包被的微孔板；3)铕元素标记的另一株D-二聚体单克隆抗体；4)洗涤液；5)增强液；6)分析缓冲液。该试剂盒采用铕元素标记抗体，铕元素属于镧系稀土金属元素，价格比较昂贵，且铕荧光寿命1ms，在水中不稳定，需要额外添加增强剂才能获得稳定的荧光。

近年来，生物分析技术领域得到了快速的发展，出现了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技术是其中最活跃的一支，在科研和实际应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点，已经在众多领域中得到了广泛的应用，尤其是在免疫分析领域已崭露头角。

表面功能化的磁性微球作为固相载体，可以用来有效地捕获核酸、蛋白分子、病毒颗粒甚至细胞，已经被广泛地应用于各种生化指标的临床诊断等领域。而微流控芯片系统具有快速、高效、集成化等特点，两者相结合，将成为一种新型的高性能检测方法，以解决当前检测方法中存在的灵敏度低，检测过程复杂，难以实现微量样本检测的问题，有望进一步推动临床检测仪器向便携化和微型化发展。

免疫磁珠的生物微流控芯片是将磁颗粒技术，免疫分析集成到微流控芯片上的一种分析检测方法，目前这种综合性的检测方法的主要难点表现为：1)液体在芯片内部微流动的智能控制，目前常采用的方法是在芯片内部设置多个微泵和微阀，使得微流控体系变得更加复杂化；2)反应体系的混合不充分，导致反应不充分；3)集成化程度不高，导致非特异性背景高。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明旨在提出一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，检验人员只需经过简单操作，即可在15分钟内实现样品中D-二聚体浓度的定量检测。检测结果灵敏度高，准确可靠，重复性好。

本发明所述一种D-二聚体定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)；其中盖片(1)上的加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)，过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接，底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；