[发明专利]一种体外套式环介导等温扩增法的检测嗜肺军团菌的试剂及检测嗜肺军团菌的方法

说明书

本发明提供了一种体外套式环介导等温扩增法的检测嗜肺军团菌的试剂，它包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物Loop‑f、环引物Loop‑r，套引物FNP、套引物BNP；本发明还提供了运用上述试剂的体外新型高效等温扩增检测嗜肺军团菌的方法，可以快速准确地检测嗜肺军团菌，对样本的检测只需30‑45分钟左右即可完成，比加入环引物的LAMP反应时间缩短30%‑50%左右，对疾病的快速诊断具有重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及一种体外检测嗜肺军团菌的试剂及方法。

背景技术

嗜肺军团菌（ Legionella pneumophila ）于1976年首次在美国被发现，是一种革兰氏阴性条件致病菌，主要通过污染建筑物中的水系传播，易大规模爆发和流行。该菌感染后发病进程快，死亡率高。在西欧国家，每年军团菌的发病人数接近10万例。随着经济发展，中央空调的普遍使用，军团菌爆发的危险性日益增加，已有多个国家将军团肺炎列为法定传染病。我国卫生部2003年颁布了《集中式空调通风系统卫生规范》，目的就是为了切断嗜肺军团菌的传染源和传播途径。目前该菌是国境口岸微小环境重点关注的微生物病原体，也是卫生检疫在口岸卫生监督的重要环节，2007年曾经在杭州机场口岸有报道检出。

军团菌病的传播特点与军团菌的生存方式有很大关系。在人工水体中，供水温度较高,或者供水管道和蓄水池的管壁和池壁上形成积垢和生物膜，就会为军团菌的大量增殖提供适宜的环境和营养条件。冷却塔的循环水和空调的冷凝水，由于水温较高，管道中容易藏污纳垢，且容易形成死水区，为军团菌提供了良好的栖息和繁殖环境。空调通风系统中军团菌大量繁殖容易形成微生物气溶胶，如遇管道渗漏，冷却塔或蒸发凝水中染有军团菌，送风时，带菌的水即被吹成细小微粒或气溶胶。在夏秋季节，军团病容易发生在配备有封闭式中央空调的公共场所中，人群普遍易感。嗜肺军团菌培养要求苛刻，生长缓慢，一般从水样收集到培养鉴定需要7～10天。培养结果受标本采集质量、操作技术的影响，阳性率不一。血清免疫学方法灵敏度和特异性不高。新型等温扩增检测方法应用于嗜肺军团菌，可对嗜肺军团菌进行快速检测，提高检测效率，并控制在比较低的成本，并对仪器设备的要求较低，有利于在基层单位中的推广。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外套式环介导等温扩增法的检测嗜肺军团菌的试剂，可以用于快速准确地检测嗜肺军团菌。为此，本发明采用以下技术方案：

它包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物Loop-f、环引物Loop-r，套引物FNP、套引物BNP；引物基因序列如下：

外引物F3：GCTGCAACCGATGCCACA；

外引物B3：TTGGGCCAATAGGTCCGC；

内引物FIP：

TTGCTGTTCGGTTAAAGCCAATTGTTGTCTTATAGCATTGGTGCCG；

内引物BIP：

ACTGAAAACAAAAACAAGCCAGGCGCGTTGCTGGCTTACCAGTTT；

环引物Loop-f：CATGCAAGACGCTATGAGTGG；

环引物Loop-r：CGGGTTTAACACCATTTCCA；

套引物FNP：

TTCAGCAGTACGCTTAGCCATCAAAATCAAGGCATAGATGTTAATCCG；

套引物BNP：

AAGCGGATGAAAATAAAGTAAAAGGGCCATCAATCAGACGACCAGTAT。