[发明专利]一种使用UPC2-ELSD测定分子蒸馏单硬脂酸甘油酯中单甘酯的方法

权利要求书

1.一种使用UPC²-ELSD测定分子蒸馏单硬脂酸甘油酯中单甘酯的方法，其特征在于，

(1)样品的制备，

分别准确称取0.01g分子蒸馏单硬脂酸甘油酯样品于100mL容量瓶中，其准确称取精确至0.0001g，用体积比为7:3的正己烷/异丙醇溶解后并定容，溶液经有机膜过滤后直接进行UPC²分析；

(2)标准工作溶液的配制，

首先配制4种单甘酯的标准品储备液，分别准确称取30mg的1-单软脂酸甘油酯、30mg的1-单硬脂酸甘油酯和3.0mg的2-单软脂酸甘油酯、3.0mg的2-单硬脂酸甘油酯至不同的10mL容量瓶中，上述溶液准确称取精确至0.1mg，之后用体积比为7:3的正己烷/异丙醇溶解并定容，配成浓度为3000mg/L的1-单甘酯和300mg/L的2-单甘酯的单一标准品储备液，

其次配制4种单甘酯的混合标准溶液，分别移取5mL 3000mg/L的1-单软脂酸甘油酯、5mL 3000mg/L的1-单硬脂酸甘油酯和5mL 300mg/L的2-单软脂酸甘油酯、5mL 300mg/L的2-单硬脂酸甘油酯的单标准品储备液于10mL容量瓶中，用体积比为7:3的正己烷/异丙醇定容，依次配成浓度为1500mg/L的1-单软脂酸甘油酯、1500mg/L的1-单硬脂酸甘油酯、150mg/L的2-单软脂酸甘油酯、150mg/L的2-单硬脂酸甘油酯的混合标准溶液，

最后再配制系列标准工作溶液，准确移取5mL混合标准溶液于10mL容量瓶中，用体积比为7:3的正己烷/异丙醇定容，再逐级稀释，即得系列标准工作溶液，1-单软脂酸甘油酯和1-单硬脂酸甘油酯的浓度为50mg/L、125mg/L、250mg/L、500mg/L、750mg/L，2-单软脂酸甘油酯和2-单硬脂酸甘油酯的浓度为5mg/L、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、75mg/L；

(3)UPC²-ELSD测定方法，

利用超高效合相色谱-蒸发光散射检测器对标准工作溶液和样品溶液进行检测，条件如下：

色谱柱：ACQUITY UPC²BEH 2-EP色谱柱，规格为100mm×2.1mm、1.7μm，

柱温：45℃，

样品室温度：10℃，

流动相A：超临界CO₂，

流动相B：甲醇:乙腈，比例为1:1、v/v，

洗脱梯度：见表1，

背压：1750psi，

流速：1.0mL/min，

进样体积：1μL，

ELSD检测器：载气压力0.5MPa，漂移管温度为50℃；

表1

时间(min)	A(％)	B(％)	曲线
初始	97	3	初始
2	97	3	6
3	95	5	6
5	88	12	6
6	97	3	6

(4)分子蒸馏单硬脂酸甘油酯样品中主要单甘酯的测定结果的计算，

采用超高效合相色谱进行分离，蒸发光散射检测器进行检测，外标法定量，以峰面积(Y)对质量浓度进行线性回归，得到线性回归方程，对配制好的单硬脂酸甘油酯样品进行测定，通过Empower 3.0软件，自动分别得到样品中的1-单软脂酸甘油酯、1-单硬脂酸甘油酯、2-单软脂酸甘油酯和2-单硬脂酸甘油酯的含量，再换算成百分比含量(％)，其计算公式为：

式中：

X—单硬脂酸甘油酯样品中4种单甘酯的百分比含量，单位为％，

w—外标法测定样品中4种单甘酯的含量，单位为mg/L，

m—样品的配制浓度，单位为mg/L。