[发明专利]一种羊血液的IgG提取物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物饲料添加剂，尤其涉及一种利用羊血制成的IgG提取物及其应用。

背景技术

在现代畜牧业中，为了提高出生动物的存活率，降低其患病，通常在饲料中添加抗生素、益生素等生物制剂，多年来的持续研究显示大规模、普遍使用抗生素会导致胃肠道细菌产生耐药性，使得抗生素用量越来越大，应用成本越来越高，其在畜产品中的残留也直接威胁着人类的健康与安全；而采用益生素则效果较差，益生素所用的益生菌在动物肠道、消化道中存活时间短，繁殖量低，导致其难以产生理想的效果。

针对上述问题，本领域近年来尝试使用在幼畜饲料中添加免疫球蛋白G代替部分抗生素、益生素，从而增强动物自身对疾病的免疫效果。免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)是具有抗体活性的，能与相应的抗原发生特异性结合反应的球蛋白，普遍存在于哺乳动物的血液、组织液、淋巴液和体外分泌液中的蛋白质。免疫球蛋白在动物体内具有重要的免疫和生理调节作用，对于改善婴幼儿、中老年人及免疫力低下人群的健康具有重要的作用。

已有的研究显示，猪、牛、羊等动物的IgG分子一般不能通过动物胎盘，只能依靠吮吸初乳获得免疫球蛋白形成被动免疫体系。由于母体胎盘的特殊结构，羔羊刚出生时体内基本没有抗体，而自身开始产生抗体的时间一般都在出生后的三周以后，羔羊从出生到自身产生主动免疫之前属于抗体空白期。因此，羔羊出生后必须通过吸吮初乳才能获得被动免疫，从而克服在生长发育的早期阶段免疫系统不健全、对病原菌感染的抵抗力弱等缺陷。对于出生后适宜时间内未能吃到充足初乳的幼畜来说，就面临着因获得被动免疫的能力下降而引起低血清IgG，容易患各种传染性疾病，使得新生仔畜抗病力降低、死亡率提高。

由于动物血液中含有1.5～2％具有活性的免疫球蛋白，是一种丰富、廉价的活性免疫球蛋白的来源，因此本领域最近几年来开展了多种从动物血液中提取免疫球蛋白的研究，常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、变性沉淀法、超滤法、柱层析法等，目前生产上应用的主要有盐析法、低温乙醇沉淀法、超滤法等。其中盐析法可以在常温下生产，是操作最简单、成本最低廉的技术方案，被本领域广为使用。例如CN101766252A公开了一种羊血高活性免疫球蛋白浓缩物及制备方法，利用柠檬酸三钠盐析结合超滤法从羊血中获得免疫球蛋白；也有其他类似的技术方案，利用硫酸铵盐析结合超滤法从羊血中获得免疫球蛋白。这两种技术方案均面临如下突出的问题：首先是分辨能力差，纯化倍数低，容易在产物中引入非免疫球蛋白成分，例如白蛋白和纤维蛋白；其次是脱盐过程时间长、耗水量大。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明公开了一种羊血液的IgG提取物，作为饲喂羔羊的免疫增强成分，通过对提取方法的改进不仅提高了IgG的提取率，而且保证了IgG的活性。

具体地说，本发明是通过如下技术方案实现的：

一种羊血液的IgG提取物，通过如下方法制备：

1)向羊血浆中加入硫酸铵至20％饱和度，静置后在4℃下离心所得上清液加入硫酸铵至50％饱和度，静置后离心所得沉淀溶解于PBS后加入硫酸铵至33％饱和度，静置后离心所得沉淀为IgG提取物粗品；

2)IgG提取物粗品用100kd的超滤膜超滤至少一次实现脱盐浓缩，超滤膜的截留物干燥后即得IgG提取物。

上述的技术方案，通过使用不同饱和度的饱和硫酸铵，并结合PBS控制pH值在7.0-7.2，提高了IgG的提取率，且不影响IgG活性。

其中，在步骤1)中33％饱和度盐析过程离心速度为4000～6000g，离心15～25min。

为了保证提取效率，在上述步骤中优选采用阶梯离心，步骤1)中33％饱和度盐析过程离心速度为6000g、5000g、4000g，各离心20min。

也就是说，将50％饱和度的上清液静置后用6000rpm、20min离心，离心后所得沉淀溶解于PBS后加硫酸铵至33％饱和度静置后用5000rpm、20min离心，离心后所得沉淀溶解于PBS后加硫酸铵至33％饱和度静置后用4000rpm、20min离心，所得沉淀即为免疫球蛋白提取物粗品。

在本发明中，为了提高超滤脱盐效果，步骤2)中将IgG提取物粗品溶解于PBS至浓度为8～10％，超滤2～3次，收取截留液。

通过上述方法，通过加入到PBS中调整pH值避免了等电聚焦现象的产生，通过少量多次脱盐，缩短脱盐时间，避免静电聚焦现象的产生。