[发明专利]一种制备抗肿瘤化合物Eupenifeldin的方法及其专用菌株

权利要求书

1.茎点菌（Phoma sp.）XZ068在制备化合物Eupenifeldin中的应用；

所述茎点菌（Phoma sp.）XZ068在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.10481。

2.一种制备化合物Eupenifeldin的方法，包括如下步骤：

（a）将茎点菌（Phoma sp.）XZ068进行固体发酵培养，得到发酵培养物；所述茎点菌（Phoma sp.）XZ068在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.10481；

（b）向所述发酵培养物中加入乙酸乙酯进行提取，得到提取液，将所述提取液进行干燥，得到粗提物；

（c）将所述粗提物进行硅胶柱层析分离得到对肿瘤细胞具有抑制活性的活性物；

（d）将所述活性物用甲醇作为溶剂清洗得到不溶物，用二甲基亚砜溶解所述不溶物后用高效液相色谱纯化得到所述化合物Eupenifeldin。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（a）中，进行所述固体发酵培养的培养基为稻米培养基；所述稻米培养基是将稻米和水按照80g：120ml的比例配制而成的；

进行所述固体发酵培养的温度为25℃，培养方式为静置培养，培养时间为30-40天。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（b）中，所述加入乙酸乙酯进行提取是指：将所述发酵培养物捣碎后，加入乙酸乙酯浸泡1天，过滤得到有机相I和残渣I；向所述残渣I中加入乙酸乙酯浸泡1天，过滤得到有机相II和残渣II；向所述残渣II中加入乙酸乙酯浸泡1天，过滤得到有机相III和残渣III；合并所述有机相I、所述有机相II和所述有机相III，即得所述提取液。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（c）中，所述硅胶柱层析为减压硅胶柱层析；

将所述粗提物进行所述减压硅胶柱层析得到所述活性物的方法包括如下（A）或（B）或（C）的步骤：

（A）采用薄层层析硅胶H，按照如下洗脱程序进行洗脱：依次采用29种流动相进行洗脱，所述29种流动相为石油醚、体积比分别为95:5、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80和10:90的共10份石油醚和二氯甲烷的混合液、二氯甲烷、体积比分别为400:1、400:2、400:3、400:4、400:6、400:8、400:10、400:12、400:14、400:16、100:5、100:6、100:8、90:10、80:20、60:40的共16份二氯甲烷和甲醇的混合液，以及甲醇，每种流动相的洗脱体积均为400mL，洗脱后分别单独收集每种流动相对应的洗脱液，共获得对应于所述29种流动相的29份洗脱液，将如下流动相对应的洗脱液干燥后即得所述活性物：体积比为400:8的二氯甲烷和甲醇的混合液，和/或体积比为400:10的二氯甲烷和甲醇的混合液；

（B）采用薄层层析硅胶H，采用体积比为400:8或400:10的二氯甲烷和甲醇的混合液进行洗脱，洗脱体积为400mL，收集洗脱流份，将所述洗脱流份干燥后即得到所述活性物；

（C）采用薄层层析硅胶H，采用如下两种洗脱液进行随机先后洗脱：体积比为400:8的二氯甲烷和甲醇的混合液，以及体积比为400:10的二氯甲烷和甲醇的混合液，所述两种洗脱液的洗脱体积均为400mL，洗脱后，收集并合并所述两种洗脱液对应的两种洗脱流份，将合并后的洗脱流份干燥后即得到所述活性物。