[发明专利]一种壳聚糖填充微型基质固相分散方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物提取领域，涉及一种提取测定青果中有效成分的方法，具体涉及一种采用壳聚糖作为吸附剂的基质固相分散技术提取检测青果中有效成分的方法。

背景技术

青果为橄榄科植物橄榄Canarium album Raeusch.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，干燥。具有清热解毒，利咽，生津等功能。可用于咽喉肿痛，咳嗽痰黏，烦热口渴，鱼蟹中毒等。青果一般用于鲜吃、加工凉果和制药。不同品种的青果某些化学成分的含量差别很大，而对不同用途的青果的药效成分有不同的要求，因此应对青果不同品种中的有效成分进行分析测定。在分析检测之前需要对样品进行预处理，传统的预处理过程(例如超声提取，回流提取，索氏提取等)一般包括提取和净化两步，因而它存在操作复杂、耗时、有机溶剂消耗量大，污染环境等缺点。

基质固相分散(MSPD)是一种样品前处理的新技术，由于它集样品分散、提取和净化与一体，因此相比于传统的方法可简化步骤，节约时间。目前传统的基质固相分散方法的吸附剂量(1～10g)、药材的用量(1g以上)、洗脱剂的用量(2～20ml)都比较大，其所用的吸附剂一般为氧化铝，C18，硅胶等，他们普遍缺乏选择性。因此开发小型的新型的基质固相分散方法也是非常有意义的。

壳聚糖是甲壳素脱乙酰基产物，它具有游离的氨基和羟基，有良好的吸附性能，壳聚糖及其衍生物具有吸附容量大、成本低、可再生性、有生物相容性、无毒、易于化学改性等优点，因而被广泛应用于医药、纺织、水处理、生物工程等领域。由于壳聚糖具有良好的吸附性能，安全无毒，因此适合用作基质固相分散的吸附剂。

目前将壳聚糖作为吸附剂结合微型基质固相分散技术用于青果中化学成分的测定尚未见报道。本发明采用壳聚糖作为基质固相的吸附剂，并极大地减少了传统基质固相萃取技术的样品用量，并可高效提取青果的有效成分。

发明内容

本发明是要解决目前提取检测青果中有效成分的方法中步骤复杂、有机溶剂 用量大、费时、选择性低等问题，采用壳聚糖为吸附剂的基质固相分散技术提取检测青果中的有效成分的方法。

壳聚糖作为吸附剂的基质固相分散技术提取检测青果中的有效成分的方法，具体是按照以下步骤完成的：

(1)称取青果粉末50mg与一定质量比的吸附剂于研钵中，研磨一定的时间，将研磨好的固体作为填料装入1ml规格的固相萃取小柱中，用0.5ml的洗脱液对小柱洗脱三次，将收集到的洗脱液挥干，再用200μl的洗脱液溶解，将离心管内的液体涡旋10s后13000rpm离心5min。取上层清液装样，用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(UHPLC-Q-TOF/MS)采样分析，得到青果有效成分的色谱图。

(2)将没食子酸对照品配制成不同浓度的对照品溶液，按富集样液的条件用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪检测，获得没食子酸的谱图，以没食子酸的进样量为横坐标，以没食子酸对照品溶液的谱图中的峰面积为纵坐标制作没食子酸标准曲线，按同样方法制作羟基酪醇、没食子酸甲酯、木犀草苷、芦丁、橄榄苦苷、鞣花酸的标准曲线。根据提取液各成分色谱图中的峰面积和各成分的标准曲线，计算得到提取液中各成分的含量。

其中(1)中所述吸附剂包括：中分子壳聚糖、低分子壳聚糖、低粘度壳聚糖、高纯度壳聚糖、羧化壳聚糖，优选为中分子壳聚糖。

所述吸附剂的质量为：6.25mg、12.5mg、25mg、37.5mg、50mg、62.5mg、75mg、87.5mg，优选为25mg。

所述研磨时间为：20s、40s、60s、80s、100s，优选为60s。

所述洗脱液包括：60％甲醇、80％甲醇、100％甲醇、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁烷，优选为60％甲醇。

本发明的有益效果是：本发明采用基质固相分散技术提取青果中的有效成分，是提取和净化一步完成，具有操作简便，节约时间，有机溶剂及样品用量少等优点。其选用壳聚糖作为吸附剂具有吸附性能好，成本低，安全无毒，可再生性等特点，提高了分析方法的选择性。使其大大优于传统的提取方法。此外本发明以超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(UHPLC-Q-TOF/MS)作为检测器具有快速、稳定、准确的特点。

附图说明

图1为本发明基质固相分散萃取方法的工艺流程图。

图2为考察吸附剂种类的基质固相分散萃取效果柱状图。图中，1、2、3、4、5、6、7分别代表没食子酸、羟基酪醇、没食子酸甲酯、木犀草苷、芦丁、鞣花酸、橄榄苦苷。