[发明专利]转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测引物组、LAMP检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测引物组，其特征在于：由外引物1、外引物2、内引物1和内引物2组成，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物1：GATATGAAGATACATGCTTAGCA(SEQ ID No：1)；

外引物2：CGACCACGGAAAAAAAACAC(SEQ ID No：2)；

内引物1：CAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCACGCTTAGTGTGTGTGTC(SEQ ID No：3)；

内引物2：CGGGGGATCCACTAGTTCTAGTGAATTCGAGCTCGGTAC(SEQ ID No：4)。

2.转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分：

(1)引物液：含有权利要求1所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测引物组，所述引物液中各引物的浓度分别为48～52μM外引物1、48～52μM外引物2，48～52μM内引物1、48～52μM内引物2；

(2)反应液：含有12mM的dNTPs、10×Isothermal Amplification反应缓冲液、150mM的MgSO₄水溶液，所述12mM的dNTPs、10×Isothermal Amplification反应缓冲液与150mM的MgSO₄水溶液的体积比是7～9：4～6：2；

(3)DNA聚合酶：DNA聚合酶的浓度为7～9U/μl；

(4)对照：阳性对照为转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

3.根据权利要求2所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述引物液中含有50μM外引物1、50μM外引物2，50μM内引物1、50μM内引物2。

4.根据权利要求2所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，Bst DNA聚合酶的浓度为8U/μl。

5.根据权利要求2所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述反应液中，12mM的dNTP：10×Isothermal Amplification反应缓冲液：150mM的MgSO₄水溶液的体积比为8：5：2。

6.根据权利要求2～5中任一项权利要求所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：还含有显色剂，所述显色剂为荧光染料Calcein。

7.根据权利要求2～5中任一项权利要求所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：还含有荧光指示剂，所述荧光指示剂为SYTO-9。

8.利用如权利要求2～5中任一项权利要求所述的转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的LAMP检测试剂盒检测转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)待检样品DNA的提取：采用CTAB法提取转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种纯化样品DNA；

2)恒温检测反应：在PCR管中配制反应体系：引物液1.8μl，反应液15.2μl，DNA聚合酶1μl，待检DNA 1～6μl，用DNase/RNase-Free Distilled Water补齐到25μl；设置阳性对照反应时，用转基因抗虫大豆MON87701及其衍生品种的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA替代待检DNA，设置阴性对照反应时，用不含目的基因的反应混合液替代待检DNA；将配制好的PCR管混匀后离心，并于60～65℃反应45～90min，并在80℃条件下持续2min；

3)结果判断：通过观察PCR管内沉淀的浊度变化来判断扩增结果。