[发明专利]肝炎疫苗致敏树突状细胞诱导特异性T细胞的构建方法

权利要求书

1.一种肝炎疫苗致敏树突状细胞诱导特异性T细胞的构建方法，包括如下步骤：

(1)获得抗原负载单核细胞衍生树突状细胞；

(2)T细胞扩增；

(3)获得肝炎病毒特异性T细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)为：采集外周血10ml，分 离外周血单个核细胞，重悬于4ml的AIM‐V培养液，然后置于37℃、50％CO₂培养箱中贴壁 培养2小时；2小时后取出，轻摇，移走悬浮细胞，在贴壁细胞，即单核细胞中加入4mlAIM‐V 培养基，该培养基内含浓度为20ng/ml的IL‐4和浓度为100ng/ml的GM‐CSF；3天后，单核细 胞补充AIM‐V培养液2ml，该培养液含浓度为20ng/ml的IL‐4以及浓度为100ng/ml的GM‐CSF， 仍置于37℃、50％CO₂培养箱中培养，使其成熟为单核细胞诱导树突状细胞；第6天时在moDCs 细胞中加入肝炎病毒疫苗原液10μg，培养24小时，即获得抗原负载单核细胞衍生树突状细 胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)为：将步骤(1)中获得的 悬浮细胞，即T细胞，移至含4ml的AIM‐V培养液的T75培养瓶，以AIM‐V培养基洗涤3次， 洗涤液量为2ml/次；然后加入终浓度为1μg/ml的OKT3和终浓度为1μg/ml的抗-CD28，置于 37℃、50％CO₂培养箱中培养；第2天：T细胞补充AIM‐V培养液5‐10ml，该培养液含浓度为 300IU/ml的IL‐2以及质量体积浓度为20％的白蛋白1.5ml；第4天：T细胞补充AIM‐V培养液 5‐10ml，该培养液内含300IU/ml的IL‐2以及质量体积浓度为20％的白蛋白1.5ml，继续在37℃、 50％CO₂培养箱中培养至第8天，获得增殖的T细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)为：将步骤(1)中获得的 抗原负载单核细胞衍生树突状细胞和步骤(2)中获得的增殖的T细胞混合共培养；第10天： 补充AIM‐V培养液5‐10ml，该培养液含浓度为300IU/ml的IL‐2以及质量体积浓度为20％的白 蛋白1.5ml；第12天：补充AIM‐V培养液5‐10ml，该培养液含浓度为300IU/ml的IL‐2以及 质量体积浓度为20％白蛋白1.5ml；第14天：获得肝炎病毒特异性T细胞。

5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述的肝炎疫苗为甲肝疫苗、 乙肝疫苗或丙肝疫苗中的任意一种。

6.根据权利要求1至5任一项所述的方法制得的体外细胞体系。

7.包含权利要求6所述体外细胞体系的细胞制剂。

8.权利要求1至5任一项所述的方法在制备用于治疗肝炎的细胞制剂中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述肝炎为甲肝、乙肝或丙肝中的任意一 种。