[发明专利]一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法。

背景技术

随着全球经济一体化，国际、国内贸易往来越来越频繁，生物成功入侵的机率也大大增加，外来物种的入侵对生态环境的破坏已经十分明显，所引起的生态问题也非常严重。

2001年在天津南开及河北衡水首次发现的黄顶菊成为了新入侵并对农业危害较大的外来入侵植物。黄顶菊(Flaveriabidentis(L.)Kuntze)，起源于南美洲，自黄顶菊被发现以来，其发生面积越来越大，2008年-2010年有关省市植保环保部门在北京、天津、河北、山东开展了黄顶菊的普查工作，调查结果显示，目前北京市自然环境内未发现黄顶菊；天津市黄顶菊发生面积约10826亩，涉及到汉沽、静海、西青、蓟县等；河北省邯郸、邢台、衡水、沧州、廊坊的16个县(市、区)已经不同程序发生了黄顶菊危害，发生面积约34.5万亩。另外，在山东省聊城市东昌府区和临清市以及德州市夏津县的乡村路边、空地均发现有黄顶菊发生，河南省安阳县有零星发生，局部已经形成了黄顶菊种群。黄顶菊一旦侵入农田，由于其中后期生长速度快，植株高大，与农作物争肥、争水、争光，严重抑制农作物生长，导致作物减产。紫云英苷又名黄芪苷，结构如式(Ⅰ)所示，是存在于多种植物中的一种黄酮苷。1955年，日本学者ToshioNakabayashi从一种蕨类植物(Pteridiumaquilinum)中分离出紫云英苷(NakabayashiT.Isolationofastragalinandisoquercitrinfrombracken,Pteridiumaquilinum.BulletinoftheAgriculturalChemicalSocietyofJapan,1955,19(2):104-109)。国内研究中，谢倩倩分离纯化了黄顶菊中的紫云英苷，并获取了4.4mg纯度98％以上的紫云英苷，并明确了紫云英苷的动态变化规律，得出紫云英苷是黄顶菊中含量最高的黄酮苷，不同样品中紫云英苷含量为0.79-16.36mg/g，这表明紫云英苷对黄顶菊的生长发育起着非常重要的作用(谢倩倩.外来入侵植物黄顶菊中活性成分的分离分析、结构鉴定及活性研究.北京:北京化工大学.2012)。

土壤是黄顶菊与伴生植物进行互作、共生的基本环境，紫云英苷是黄顶菊植株体内含量最高的黄酮类物质，紫云英苷经黄顶菊根部分泌、植株淋溶等方式进入土壤后，与土壤生物因子与非生物因子发生作用，有利于黄顶菊的成功入侵，因此，阐明紫云英苷在土壤中的环境行为，是解析黄顶菊入侵机制的关键环节，研究紫云英苷在黄顶菊根际土壤中的环境行为的前提条件是如何快速有效的从土壤中提取分离紫云英苷，从而能够更好地从次生代谢角度解释黄顶菊入侵机制，为防控黄顶菊提供机理性技术支持。

发明内容

本发明的目的是为了从土壤中提取分离紫云英苷，以研究紫云英苷在黄顶菊根际土壤中的环境行为，从而更好地从次生代谢角度解释黄顶菊入侵机制，为防控黄顶菊提供机理性技术支持。

本发明提供了一种从土壤中提取分离紫云英苷的方法，所述方法包括：

(1)将土壤样品过10-40目筛，然后在60-80℃烘干至恒重；

(2)加入提取液，混匀后超声提取25-35min，然后离心收集上清液；

(3)离心后的沉淀重复进行步骤(2)1-2次；

(4)合并步骤(2)和步骤(3)的上清液，蒸发浓缩除去甲醇；

(5)进行固相萃取；

其中，所述提取液为0.01-0.02g/mL的EDTA水溶液、0.06-0.08g/mL的NaHCO₃水溶液、甲醇的混合液，EDTA水溶液和NaHCO₃水溶液的总体积与甲醇的体积比为1：0.25-4。

优选地，EDTA水溶液和NaHCO₃水溶液的总体积与甲醇的体积比为1：1-4。

优选地，EDTA水溶液和NaHCO₃水溶液的体积比为1：0.5-1.5，更优选为1：0.9-1.2。

优选地，步骤(2)中，相对于1g经步骤(1)处理后的土壤，提取液的加入量为2-4mL。

优选地，步骤(2)中，离心的条件包括：转速为4000-6000rpm，时间为4-6min。

优选地，步骤(5)中，固相萃取的条件包括：固相萃取柱为Poly-SeryHLBSPE小柱，依次用甲醇、超纯水淋洗柱子进行活化，用甲醇进行洗脱。