[发明专利]一种检测A型猪流感病毒的RT-LAMP试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种检测A型猪流感病毒的RT‑LAMP试剂盒及其用途。所述试剂盒主要由四条LAMP引物、LAMP反应液和阳性模板组成。实验证明，本发明试剂盒具有良好的特异性、灵敏度，扩增快速、高效，且结果判定简便。本发明的检测体系在63℃等温条件下，能快速、特异、高灵敏度地检测到H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒，不需要复杂仪器，操作简单，能较好满足对猪流感病毒的现场检测，为动物流感病毒检测提供了新的技术平台，能较好的满足目前对养殖场、兽医诊断服务机构、出入境检疫等部门现场检测的迫切需要，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

技术领域

本发明涉及一种检测猪流感病毒的引物以及试剂盒，尤其涉及用于检测A型猪流感病毒的通用型RT-LAMP引物组、以及检测A型猪流感病毒的通用型RT-LAMP试剂盒。本发明属于生物检测技术领域。

背景技术

流感病毒(Influenza virus)属于正粘病毒科流感病毒属。流感病毒基因组是由8条负链RNA节段组成，编码11或12个蛋白。猪流行性感冒(Swine influenza，SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)引起的猪的一种急性、传染性呼吸器官疾病。其特征为突发，咳嗽，呼吸困难，发热及迅速转归。该病流行传播迅速，导致猪群生产性能严重下降并伴随死亡。目前，SI在世界范围内广泛存在，主要流行亚型为H1N1、H1N2和H3N2。猪流感的另一危害是其与人流感密切相关。2009年4月引起全球范围爆发的甲型H1N1流感(PandemicH1N1/2009,pH1N1/2009)，对人类的生命和财产安全都造成了巨大的损失。研究表明该病毒8个基因片段均来自于SIV，又一次地突出了猪作为中间宿主及其在流感病毒跨种间传播中的重要作用。

2009年以前，我国猪群中主要流行经典型(Classical,CS)H1N1、(Eurasianavian-like,EA)H1N1和北美三重组(Triple reassortant,TR)H1N2，很少发生基因重组。2009年甲型H1N1流感大流行毒株的在短时间内造成全球人的感染，继而又从人传播到包括猪在内的其他哺乳动物，该病毒目前已经在北美、欧洲及亚洲等多个国家的猪群中分离到，并且在一些国家已经分离到2009甲型H1N1流感病毒与传统猪流感病毒的基因重组病毒。我国于2009年11月份从猪群中监测到该新型病毒的存在，监测结果显示pH1N1/2009流感病毒在猪群中持续存在，和EA-H1N1以及TR-H1N2以及人源H3N2共同流行于我国猪群当中，产生了多基因型的重组病毒，并且该类病毒对猪表现出不同程度致病性，可导致猪的生产性能下降。猪在流感病毒变异与种间传播过程中具有重要的公共卫生意义，禽流感病毒和人流感病毒均可感染猪，多种来源的流感病毒在猪体内可发生基因片段交换，产生新的病毒可能跨越种间屏障传播到人群当中。在北美、欧洲和亚洲等地区，近年来SIV感染人的事件多有发生，对人类健康和生命造成巨大的威胁。pH1N1/2009类病毒对猪群的感染改变了我国猪流感流行病学状况，产生了多基因型的SIV，形成多基因型SIV共流行的态势。从这一角度讲，一个有效的诊断方法必须能对当前所有流行的SIV(包括CS-H1N1、EA-H1N1、pH1N1/2009、TR-H1N2和H3N2)检出，才能满足准确诊断的需要。

常规的SIV诊断方法有：病毒分离、血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学(IHC)等，随着分子诊断技术的发展，RT-PCR以及荧光定量PCR等方法也应用到SIV的检测工作当中。然而，有些方法存在检测周期长、灵敏度不高、特异性不强的问题，有些方法需要特殊的仪器设备，不适合养殖场和动物疾病诊断机构临床样本的检测。如今，随着对动物疾病快速诊断的需要的增加，迫切需要适合养殖场、动物疾病诊断机构和边境口岸的简便、快速检测方法及试剂。