[发明专利]一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及虾青素提取领域，特别涉及一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法。

背景技术

虾青素的来源主要有两种，一种是化学合成，另一种是生物提取，生物提取的原料主要有雨生红球藻、虾蟹的下脚料、红发夫酵母发酵物等。生物提取的方法很多，如超临界CO₂萃取法、化学溶剂提取法等，通过生物提取得到的粗提物，再进行皂化、分离纯化。目前分离纯化的方法主要为柱层析方法，柱层析的方法中根据固定相的不同，分为正相柱层析法与反相柱层析法，正相柱层析主要以硅胶作为固定相的填料，采用二氯甲烷-正己烷作为流动相，进行柱层析；反相柱层析主要以键合硅胶C₁₈作为填料，采用甲醇-水作为流动相，进行柱层析。经过上述方法提取可得到纯度约为80-90%的虾青素。

但是，由于现有提取方法的破壁、提取和分离工艺的限制，其制备得到的虾青素的得率低（＜1%）、纯度低（≤90%）、成本高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法，其制备的虾青素得率高、纯度高、成本低。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法，包括：

（1）取雨生红球藻，加入雨生红球藻量15-75倍的盐酸，在35-95℃浸泡3-15min破壁，过滤，取药渣；

（2）加入雨生红球藻量15-75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15-65℃提取2-4次后，过滤，合并滤液，滤液加入KOH醇溶液，在3-15℃皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干；

（3）用二氯甲烷萃取虾青素，以硅胶作为固定相，二氯甲烷、乙醇作为流动相，进行梯度洗脱，梯度浓度由100:0到90:10，分离得到虾青素成品。

作为上述方案的改进，所述方法包括：

（1）取雨生红球藻，加入雨生红球藻量45-55倍的盐酸，在65-75℃浸泡8-12min破壁，过滤，取药渣；

（2）加入雨生红球藻量45-55倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在35-45℃提取2-4次后，过滤，合并滤液，滤液加入KOH醇溶液，在8-12℃皂化5-15min后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干；

（3）用二氯甲烷萃取虾青素，以硅胶作为固定相，二氯甲烷、乙醇作为流动相，进行梯度洗脱，梯度浓度由100:0到90:10，分离得到虾青素成品。

作为上述方案的改进，所述方法包括：

（1）取雨生红球藻，加入雨生红球藻量50倍的盐酸，在70℃浸泡10min破壁，过滤，取药渣；

（2）加入雨生红球藻量50倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在40℃提取3次后，过滤，合并滤液，滤液加入4%KOH醇溶液，在10℃皂化10min后，用盐酸调PH值至中性，浓缩至干；

（3）用二氯甲烷萃取虾青素，以硅胶作为固定相，二氯甲烷、乙醇作为流动相，进行梯度洗脱，梯度浓度由100:0到92:8，分离得到虾青素成品。

作为上述方案的改进，在步骤（2）中，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷与乙醇的比例为1-3:0.5-1。

作为上述方案的改进，在步骤（2）中，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷与乙醇的比例为2:1。

作为上述方案的改进，在步骤（3）中，梯度浓度由100:0到92:8。

作为上述方案的改进，所述盐酸选用浓度为4mol/L的盐酸。

作为上述方案的改进，所述虾青素成品的纯度≥98.5%。

实施本发明具有如下有益效果：

本发明提供了（1）高效的破壁方法与工艺参数：加入雨生红球藻量50倍的4N盐酸，在70℃浸泡10min进行破壁；（2）高效的提取方法与工艺参数：加入雨生红球藻量50倍的二氯甲烷-乙醇的混合液（二氯甲烷：乙醇=2:1），在40℃提取3次；（3）高效的分离方法与工艺参数：以硅胶作为固定相，二氯甲烷-乙醇（100:0→92:8）作为流动相，进行梯度洗脱。通过本方法从雨生红球藻中制备的虾青素得率高，得率可以达到1.8%，纯度高，纯度可达到98.5%，远远超过现有文献报道的方法制备的得率与纯度。而且，本发明提取分离方法简单，反应条件要求少，成本低，可大规模推广使用。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细描述。

本发明提供一种从雨生红球藻中提取分离虾青素的方法，包括：