[发明专利]一种12种呼吸道病毒核酸多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种12种呼吸道病毒核酸多重PCR检测试剂盒，包括有用于扩增如下12种呼吸道病毒特异基因位点的引物：甲型流感病毒（Inf A）、甲型流感H1N1（2009）、甲型流感病毒H3N2、人副流感病毒（HPIV1）、人副流感病毒（HPIV2）、人副流感病毒（HPIV3）、人副流感病毒（HPIV4）、人偏肺病毒（hMPV）、呼吸道腺病毒（AdV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、博卡病毒（BoV）及冠状病毒（CoV）。本发明具有以下优点：本发明所述的试剂盒能够多重检测、灵敏度高且使用快捷方便。此外，本发明采用特异性的引物序列，保证检测结果的可靠性；该检测方法操作简单，省时省力；检测通量大，试剂耗材成本低；可直接对呼吸道病原体样本提取的核酸进行检测；对检测平台和人工技术水平要求低，能够在常规检测中广泛推广。

技术领域

本发明属于基因检测领域，涉及一种由通用引物介导的多重PCR扩增方法检测12种呼吸道病毒核酸的试剂盒。

背景技术

呼吸道感染是世界范围内最常见的疾病之一，发病率在各国居民发病率总体结构中占据主要地位,每年的流行高峰期约有10％的居民患有呼吸道感染。造成呼吸道感染的主要由各种呼吸道病毒以及一些细菌、支原体、衣原体。病毒中常见的是甲型流感病毒(InfA)、甲型流感H1N1(2009)、甲型流感病毒H3N2、人副流感病毒(HPIV1)、人副流感病毒(HPIV2)、人副流感病毒(HPIV3)、人副流感病毒(HPIV4)、人偏肺病毒(hMPV)、呼吸道腺病毒(AdV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、博卡病毒(BoV)及冠状病毒(CoV)等。这些呼吸道病毒大都具有很强的感染力而且传播快、潜伏期短、发病急。并且有越来越多的新的致病性呼吸道病毒被发现,给临床相关疾病诊断和治疗造成极大的困难。而且由于近些年,呼吸道病原体所引发的疫情不断发生,一些呼吸道病毒如甲型流感病毒、腺病毒以及不断变异的新型病毒所导致爆发的疫情成为公共卫生领域面临的一个重要的问题,带来了很大的经济损失及社会危害。呼吸道病原体所引发的疾病及疫情的病原学复杂,精确的病原学分析不仅可以为疾病确诊提供充足的依据，也可以为选择合理的治疗方案提供坚实的基础。

流感病毒(influenza vims,Flu)即流行性感冒病毒,正黏病毒科,会造成急性上下呼吸道感染,并借由空气迅速的传播,引发疫情流行。根据抗原性流感病毒可分为三类:甲型、乙型和丙型流感病毒。其中甲型流感病毒抗原性易发生变异,可引起世界性大流行。流感的特点是发病率高,病死率低,死亡通常由并发细菌性感染所致。但其可造成疫情流行,近100年来,已出现数次不同亚型流感病毒的全球大流行全球人口流动性不断增加,流感病毒交替、混合流行成为常态。1918年西班牙流感,H1N1,死亡4000-5000万人,1997年香港禽流感,H5N1,死亡率达63％，2013年4月我国H7N9流感病毒疫情爆发,引发多地感染,造成经济损失和社会恐慌。目前在人群中流感病毒主要以H1N1(2009)、H1N3流感病毒形式存在。

人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV),副黏病毒科,主要可以引起儿童下呼吸道感染,其致病性仅次于呼吸道合胞体病毒(RSV)。人类人副流感病毒可以造成反复发作的感冒和喉晚痛等上呼吸道感染，也能造成严重的反复感染的肺炎,支气管炎和细支气管炎下呼吸道疾病。人副流感病毒也可以暴发疫情流行,其中疫情暴发以人副流感病毒III型为主,其流行以局部地方性流行为主,且四季均可以暴发流行。人副流感病毒I型疫情流行常见于幼儿，发生于儿科病房、幼儿园、小学及其他儿童场所。人副流感病毒I型或II型引起的流行性疾病有每年均可发生并交替占主导地位的倾向。

人偏肺病毒(human metapneumovirus，HMPV)，副黏病毒科,偏肺病毒属，为由包膜的单股负链RNA病毒，其基因组RNA长约13kb。目前认为，人类是hMPV已知的唯一天然宿主，hMPV感染为全年散发，但大多有明显季节性，可导致各年龄阶段的急性呼吸道感染，临床表现与同属副黏病毒科的呼吸道合胞病毒所致疾病相似。近年来HMPV已和呼吸道合胞病毒、腺病毒等一样被认为是导致小儿急性呼吸道感染的主要病原。