[发明专利]一种产纤溶酶枯草芽孢杆菌及发酵方法和应用

说明书

本发明公开了一种产纤溶酶枯草芽孢杆菌及发酵方法和应用，所述枯草芽孢杆菌分离、筛选自中国重庆的传统发酵食品豆豉中，所述的枯草芽孢杆菌DC27保藏在中国典型培养物保藏中心，CCTCC NO：M 2015573，本发明进一步提供了该菌株的液体发酵方法，所得发酵液中的纤溶酶活力可达4506IU/mL。该菌株来源于食品且能分泌高活性的纤溶酶，安全无毒，可应用于预防或缓解血栓性疾病的功能性食品或药品的开发中，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种产纤溶酶枯草芽孢杆菌及发酵方法和应用，本发明所述的枯草芽孢杆菌分离筛选至豆豉，具有高产豆豉纤溶酶的能力，可用于预防或缓解血栓性疾病的功能性食品或药品的开发中。

背景技术

心血管疾病(cardiovascular disease，CVDs)，如急性心肌梗死、缺血性心脏病和高血压是世界上人类死亡的主要原因之一。据2001年世界卫生组织报告，每年约有1700万人死于CVDs，到2020年，因CVDs而导致的每年死亡人数将增至2500万。在不同类型的CVDs中，血栓性疾病已成为威胁人类健康的最主要的病因之一。因此，如何有效地预防和治疗血栓性疾病，已引起国内外医学界和科技界的高度重视。

治疗血栓性疾病的方法主要有外科手术、保守疗法和溶栓疗法三种，其中溶栓疗法以纤溶酶作为溶栓剂，使血管再通，治疗费用较低，是目前治疗血栓性疾病最为有效和可靠的手段。相比临床上使用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶(UK)和链激酶(SK)等溶栓药物，食品来源的纤溶酶，如纳豆激酶和豆豉纤溶酶不仅血栓溶解能力强，而且具有安全无毒、不引起内出血、生产成本低、在胃肠里的稳定性好以及在体内的半衰期长等优点。豆豉是我国传统的大豆发酵食品，有上千年的历史，制作方式比日本的纳豆复杂。据中国药典记载：豆豉具有开胃增食，消积化滞，祛风散寒以及预防心血管疾病等功效，经研究发现，豆豉中的纤溶酶活性比纳豆来源的纳豆激酶活性更高。近年来，科研工作者相继从中国的豆豉、日本的纳豆、韩国的豆酱和印尼的天培等传统发酵食品中发现并获得产纤溶酶的菌株。然而，目前国内的纤溶酶产品活性普遍偏低。因此，从传统的发酵食品中分离筛选高活性的纤溶酶菌株，并对其发酵方法进行研究，可为预防或治疗血栓性疾病功能性食品或药品的开发奠定良好的基础，具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌DC27，该菌株具有高产豆豉纤溶酶的特性，安全无毒，可用于预防或治疗血栓性疾病功能性食品或药品的开发，该菌株已于2015年9月23日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)DC27，保藏编号：CCTCC NO：M 2015573，地址：中国武汉武汉大学。

本发明还有一个目的在于提供了一种枯草芽孢杆菌的液体发酵方法，方法简单，易行，利用本发明提供的发酵方法，采用50L发酵罐所得发酵液中的纤溶酶活力可达4506IU/mL。

本发明的最后一个目的在于提供了枯草芽孢杆菌DC27在制备纤溶酶中的应用，所述的应用包括利用该菌株生产的纤溶酶制备各种目前市场上流通的含有纤溶酶的产品。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种枯草芽孢杆菌DC27，其筛选过程如下：

1)利用初筛培养基分离和筛选传统发酵豆豉中的芽孢菌，根据平板上的透明圈和菌落大小的直径的比值来确定酶活较高的菌株。

初筛培养基：酪蛋白0.4％，NaCl 0.5％，琼脂2％。

2)利用复筛培养基将初筛获得的菌株进行复筛，通过纤溶酶活性测定和在血琼脂培养基上的溶血性试验选择纤溶活力高且安全的菌株。