[发明专利]引起对抗黄病毒的免疫应答的抗原及其应用方法

权利要求书

1.一种编码蛋白E的共有DIII域的分离核酸，所述分离核酸包括：

(a)SEQIDNO:12、13或14；

(b)编码氨基酸序列SEQIDNO:9、10或11的核苷酸序列；或

(c)(a)或(b)的互补物。

2.根据权利要求1所述的分离核酸序列，其中所述核酸是SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:14。

3.一种遗传构建体，其包含根据权利要求1所述的分离核酸序列。

4.根据权利要求3所述的遗传构建体，其还包含Kozak序列SEQIDNO.15。

5.根据权利要求3或4中任一项所述的遗传构建体，其还包含选自IgG或IgE的一部分的前导序列。

6.根据权利要求5所述的遗传构建体，其中所述前导序列包含核酸序列SEQIDNO.8。

7.一种包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含：

(a)SEQIDNO:9、10或11；或

(b)(a)的片段。

8.根据权利要求7所述的多肽，其中所述多肽还包含选自IgG和IgE的一部分的N-末端前导氨基酸序列。

9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述N-末端前导氨基酸序列包含序列SEQIDNO:7。

10.一种能够在宿主中产生对抗多种WNV和JEV血清型的免疫应答的DNA疫苗，所述疫苗包含：

(a)包含启动子的遗传构建体，所述启动子与含有根据权利要求1所述的核酸的编码序列可操纵地连接；和

(b)药学上可接受的赋形剂，

其中，所述遗传构建体能够在所述宿主的细胞中以有效引起免疫应答的数量表达蛋白E抗原的共有DIII域。

11.根据权利要求10所述的疫苗，其中所述遗传构建体还包含在所述编码序列的3'端之后的聚腺苷酸化序列。

12.根据权利要求10所述的疫苗，其中所述遗传构建体经密码子优化。

13.根据权利要求10所述的疫苗，其中所述药学上可接受的赋形剂是佐剂。

14.根据权利要求13所述的疫苗，其中所述佐剂选自IL-2、IL-15、IL-28和RANTES。

15.根据权利要求14所述的疫苗，其中所述药学上可接受的赋形剂是转染辅助剂。

16.一种在宿主中引起对抗多种黄病毒的病毒血清型的免疫应答的方法，所述方法包括：

(a)将根据权利要求10所述的疫苗递送到所述宿主的组织中；和

(b)利用递送能量脉冲的电穿孔设备将所述组织的细胞电穿孔，所述能量脉冲有效地使所述疫苗的遗传构建体进入所述细胞。

17.根据权利要求16所述的方法，其中步骤(a)包括将所述疫苗注射到皮内、皮下或肌肉组织中。

18.根据权利要求16所述的方法，其中将所述电流预设定，从而以与所述预设定的电流相等的恒定电流将能量脉冲递送到所述组织中。

19.根据权利要求16所述的方法，其中所述电穿孔步骤还包括：

(a)测定所述经电穿孔的细胞中的阻抗；

(b)相对于所述测定的阻抗调整所述能量脉冲的能量水平，从而保持所述经电穿孔的细胞中的恒定电流；

其中，所述测定和调整步骤在所述能量脉冲的寿命时间内进行。

20.根据权利要求16所述的方法，其中所述电穿孔步骤包括根据以分散模式递送能量脉冲的脉冲顺序模式将所述能量脉冲递送至多个电极。