[发明专利]一种叶艺兰组培生产方法

权利要求书

1.一种叶艺兰组培生产方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1、材料选择：选择叶艺兰组培增殖的PLB作为培养材料；

步骤2、PLB增殖：自基部将完整的PLB切下后，整个接种到增殖培养基上，通过完整的PLB表面分化出新PLB进行增殖；

步骤3、PLB分化：将经过筛选增殖的PLB转接到液体分化培养基上，震荡培养14～21天后PLB上端分化出苗；

步骤4、生根壮苗培养：将分化培养基上形成的1cm左右高的带艺小苗转接到生根培养基上，培养5～10天至小苗下端生根，继续培养30～50天至形成健壮植株；

步骤5、试管苗移栽：当植株3～5cm高时，，将培养瓶转移到自然光下炼苗7～10天，然后将其从培养容器中取出，洗净根部的培养基，移入经发酵的松树皮培养基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达95%以上。

2.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：步骤2中的培养条件为培养温度22～24℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；步骤3中的培养条件为培养温度25～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，摇床转速100rpm；步骤4中的培养条件为培养温度25～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。

3.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：自PLB基部切割获得完整的PLB作为外植体，通过完整的PLB表面分化出新PLB进行增殖。

4.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：步骤2中增殖培养基采用1/2MS培养基为基本培养基，附加蛋白胨0.5～3g.L^-1、水解酪蛋白0.2～0.5g.L^-1、萘乙酸0.1～1mg.L^-1、多效唑0.1～0.5mg.L^-1、香蕉匀浆50～200g.L^-1、蔗糖15～30g.L^-1、琼脂6～7g.L^-1、活性炭0.5～2g.L^-1；pH5.4～5.6。

5.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：步骤3采用液体培养法，分化培养基采用1/2MS培养基为基本培养基，附加蛋白胨0.5～3g.L^-1、水解酪蛋白0.2～0.5g.L^-1、噻重氮苯基脲0.1～0.5mg.L^-1、椰子乳50～200ml.L^-1、蔗糖15～30g.L^-1；pH5.4～5.6。

6.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：步骤4中生根壮苗培养基的成分包括：花宝1号1.5～3g.L^-1、蛋白胨0.5～3gg.L^-1、水解酪蛋白0.2～0.5g.L^-1、萘乙酸0.5～2mg.L^-1、香蕉匀浆50～200g.L^-1、蔗糖15～30g.L^-1、琼脂6～7g.L^-1、活性炭0.5～2g.L^-1、其余为MS培养基中的维生素和肌醇成分；pH5.4～5.6。

7.根据权利要求1所述的叶艺兰组培生产方法，其特征在于：在增殖培养继代过程中，结合PLB颜色进行筛选，将明显白化的和深绿色的外植体去除，只保留鲜绿色PLB。