[发明专利]重组人白细胞介素-1受体拮抗剂的纯化方法有效
| 申请号： | 201510716792.7 | 申请日： | 2015-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN105218657A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 李明刚;史菲菲 | 申请（专利权）人： | 北京北医联合药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 白细胞 受体 拮抗剂 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组人白细胞介素-1受体拮抗剂的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S01预处理：利用发酵罐获得菌液，对菌液进行离心处理得到菌体；
S02均质处理：将所述菌体加入均质机充分破碎10min，加10-30倍的去离子水，均质压力为60-200MPa，均质次数为1-3次，获得均质液；
S03纯化处理，具体包括：
S03-1配制第一缓冲液和第二缓冲液：第一缓冲液为含10mMNaCl的50mMTris-HCl，pH为7.8；第二缓冲液为100mMNaCl的50mMTris-HCl，pH为7.8；
S03-2准备层析柱：层析柱床高度为15cm，层析柱使用前先以蒸馏水冲洗1CV，再以第一缓冲液冲洗2CV，然后以第二缓冲液清洗5CV，最后以第一缓冲液冲洗5CV，流速为120cm/h；
S03-3上样：将均质液调制为蛋白浓度约为15mg/mL，上样于层析柱上，流速120cm/h，上样体积不超过1.3CV；
S03-4洗脱：上样完毕后，以第一缓冲液冲洗层析柱至基线平稳，以20mMPB，pH为6.8，清洗2CV，再以含100mMNaCl的20mMPB，pH为6.8为洗脱液洗脱目的蛋白，流速为120cm/h，收集洗脱组分得到重组人白细胞介素-1受体拮抗剂。
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