[发明专利]一种爪哇根结线虫效应基因Mj-1-1，相关蛋白及其应用

权利要求书

1. 一种爪哇根结线虫效应基因Mj-1-1，其特征在于，所述效应基因Mj-1-1的cDNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种权利要求1所述效应基因Mj-1-1编码的蛋白MJ-1-1，其特征在于，所述蛋白MJ-1-1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.权利要求1所述爪哇根结线虫效应基因Mj-1-1或权利要求2所述蛋白MJ-1-1在防治根结线虫和/或在提高植物抗根结线虫能力方面的应用。

4.权利要求1所述爪哇根结线虫效应基因Mj-1-1在构建抗根结线虫植物中的应用，其特征在于，所述应用的方法是将含有爪哇根结线虫效应基因Mj-1-1的重组表达载体利用农杆菌导入至目的植物中，或者通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导入或基因枪的生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株，得到抗根结线虫的转基因植物。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述应用的方法为：

S1.构建重组表达载体1300-RNAi-Mj1

S11.以爪哇根结线虫cDNA为模板，分别以引物对Mj1Sac和Mj1Pst，以及Mj1Sph和Mj1Kpn，进行PCR扩增；

S12.将得到的PCR产物分别使用限制性内切酶Sac I和PstI、Sph I和Kpn I进行酶切，纯化回收后，均连接至经限制性内切酶Sac I和Pst I、以及Sph I和Kpn I酶切的载体pMin，获得重组表达载体pMin-Mj-1-1；

S13.使用限制性内切酶BamH I和Hind Ⅲ对重组表达载体pMin-Mj-1-1进行双酶切，纯化回收后连接至经限制性内切酶BamH I和Hind Ⅲ双酶切的植物表达载体pCambia1300，获得重组表达载体1300-RNAi-Mj1；重组表达载体1300-RNAi-Mj1中酶切位点BamH I和HindⅢ之间插入了基因Mj-1-1的双链DNA片段；

S2.将重组表达载体1300-RNAi-Mj1转化根癌农杆菌EHA105，得到重组农杆菌A；

S3.重组农杆菌A转化烟草，进行组织培养，用引物HygF和HygR，以及IntronF和IntronR检测为阳性的转基因烟草植株即为Mj-1-1 RNAi转基因烟草；

其中，步骤S11所述引物Mj1Sac的序列如SEQ ID NO.23所示，引物Mj1Pst的序列如SEQID NO.24所示，引物Mj1Sph的序列如SEQ ID NO.25所示，引物Mj1Kpn的序列如SEQ IDNO.26所示；

步骤S3所述引物HygF的序列如SEQ ID NO.27所示，引物HygR的序列如SEQ ID NO.28所示，引物IntronF的序列如SEQ ID NO.29所示，引物Intron R的序列如SEQ ID NO.30所示。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，步骤S13所述基因Mj-1-1的双链DNA片段如SEQ ID NO.31所示。