[发明专利]一种利用ghrelin促进新生雏鸡免疫器官发育的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及减少新生雏鸡免疫器官发育的方法具体涉及一种利用ghrelin促进新生雏鸡免疫器官发育的方法及应用。

背景技术

一些鸟类包括鸡，一出壳就立即摄食，伴随着食物的摄入，共生菌开始栖息，致病菌也开始侵入，但其淋巴细胞功能发育成熟发生在2周以后，加上鸡的母源抗体保护力差，因而各种疾病随之出现。现有技术中主要通过雏鸡出壳后的一系列方法来提高雏鸡的免疫功能，比如：疫苗。然而在雏鸡免疫器官发育健全之前，免疫器官对疫苗的免疫应答能力较差，疫苗的效果就大打折扣。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种利用ghrelin促进新生雏鸡免疫器官发育的方法及应用。

本发明的技术方案是：一种利用ghrelin减少新生雏鸡免疫器官发育的方法，具体是通过在受精蛋开始孵化的第五天至第十五天之间向卵白内注射至少一次ghrelin溶液。

本发明的进一步改进包括：

所述ghrelin溶液的浓度为100-150ng/ul，每次每蛋注射量为0.1ml。

在受精蛋开始孵化的第五天和第十五天时，分别向卵白内注射一次ghrelin溶液。

在受精蛋开始孵化的第五天时，每枚蛋注射浓度为100ng/ul的ghrelin溶液0.1ml。

在受精蛋开始孵化的第五天时，每枚蛋注射浓度为150ng/ul的ghrelin溶液0.1ml。

在受精蛋开始孵化的第十五天时，每枚蛋注射浓度为100ng/ul的ghrelin溶液0.1ml。

在受精蛋开始孵化的第十五天时，每枚蛋注射浓度为150ng/ul的ghrelin溶液0.1ml。

本发明的另一目的在于，ghrelin在促进新生雏鸡免疫器官发育中的应用。

本发明实施方法简单，通过卵内饲喂，能显著提高鸡胚出壳时法氏囊指数、法氏囊滤泡面积、法氏囊滤泡内PCNA阳性率，能显著提高鸡胚出壳时脾脏指数、脾脏细胞PCNA光密度值以及脾脏动脉周围组织淋巴鞘

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做详细说明。

实验材料与方法

1试验材料

1.1实验动物

选用Ross肉鸡受精种蛋(新乡大用有限公司)称重，挑取重量在65-70g的蛋140枚，随机分成7组，每组20枚，分别为Control组(正常孵化倍，不做任何处理)、E5-100组、E5-150组、E5-醋酸组、E15-100组、E15-150组、E15-醋酸组。对各组蛋进行编号，记录。孵化条件：37.5±0.2℃，相对湿度55±2％。

1.2动物处理：卵内喂食ghrelin

Control组在整个孵化的过程中不做任何处理；

E5-100组在E5胚龄时每枚蛋注射浓度为100ng/ul的ghrelin溶液0.1ml；

E5-150组在E5胚龄时每枚蛋注射浓度为150ng/ul的ghrelin溶液0.1ml，

E5-醋酸组在E5胚龄时每枚蛋注射醋酸0.1ml；

E15-100组在E15胚龄时每枚蛋注射浓度为100ng/ulghrelin溶液0.1ml，

E15-150组在E15胚龄时每枚蛋注射浓度为150ng/ulghrelin溶液0.1ml。

E15-醋酸组在E5胚龄时每枚蛋注射醋酸0.1ml；

ghrelin溶液的配方：鼠ghrelin粉末，用浓度为0.1％醋酸稀释。

卵内喂食的具体步骤：E5(开始孵化的第五天)胚龄时，通过照蛋器照蛋发现卵白的位置在气室的正下方，E15胚龄时，通过照蛋器照蛋，发现卵白的位置在气室的斜下方，标出注射位点。采用22G针头卵白注射ghrelin溶液，注射后，玻璃纸蜡封注射口，继续孵化，此时，孵化器摇蛋按钮关闭，24小时后，蜡封的口凝固后，重新打开摇蛋按钮，继续孵化。

1.3组织取材

雏鸡出壳后新生雏鸡称重，记录。按100㎎/100g体质量乌拉坦麻醉，然后颈椎脱臼处死，其中每组17只鸡取脾脏和法氏囊用0.75％的生理盐水冲洗干净，用滤纸吸去多余的水分，再用万分之一的分析天平称重后置于4％的多聚甲醛磷酸缓冲液(PH7.4)中固定。

2试验方法

2.1石蜡切片制作