[发明专利]miR-197在作为肝癌检测标志物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及miR-197在作为肝癌检测标志物中的应用。

背景技术

肝细胞性肝癌(HepatocellularCarcinoma,HCC，以下简称肝癌)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高、侵袭力强、预后差，死亡率位居世界肿瘤死亡第二位。中国是肝癌高发区，据统计每年发患者数占全球约55％。肝癌发病比较隐匿，早期缺乏特异的临床表现，发现时往往已经属于中晚期。提高肝癌患者长期生存率的原则是早发现、早诊断、早治疗，其中的关键是早期诊断。

目前，最常用的肝癌常规诊断方法有影像学检查、肝组织活检或细胞学检查以及肿瘤血清标志物检查。但是，影像学检查分辨率较差且存在难以检测的盲区，而肝穿刺活检取样过程复杂，易造成较大创伤且易产生假阴性结果，因此，目前最理想的肝癌诊断方法是非创性的肿瘤血清标志物检查。熟知的肝癌血清标志物比较多，如甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)、α-L岩藻糖苷酶(AFU)等。但这些标志物在应用过程之中普遍存在敏感度或特异度不高、在高危人群筛查和复发监测中缺乏有效的预警作用等局限性。就当前临床现状来看，AFP仍是应用非常广泛的肝癌检测标志物，其阳性率最高也仅为66.7％。

近年研究发现，血液中存在丰富而稳定的miRNA，其表达谱具有明显的组织特异性，并且在不同疾病、不同肿瘤患者血清中也具有特异的表达谱，因此外周血miRNA作为潜在标志物在肿瘤诊断中具有明显优势(PNAS,2008,105(30):10513-18)，目前已经报道血清中的循环miRNA在多种肿瘤的诊断中具有较高的特异性和灵敏度(MolecularCancer,2010,9(306):1-9)。早在2009年就出现了有关肝癌的miRNA血清标志物研究，至今已报道的具备肝癌诊断潜在价值的miRNA就有miR-21、miR-122、miR-210等多种(Biomarkers,2009,14(7):529-38；MolCarcinog,2011,50(2):136-42；EurJCancer,2013,49(16):3442-9)。但是，上述研究普遍采用样本血清中原本就存在的核酸作为内源性参照，例如RNU6B、RNU44、RNU48、miR-16等。由于miR-16本身在肿瘤发生过程发挥功能，其表达水平并不稳定；而RNU6B等短序列RNA在血清中含量极低不易检测，必然无法避免病患间的个体差异以及实验过程造成的误差(BMCClinicalPathology,2014,14:27)。因此，如何选取血清miRNA实验的内源性参照物至今还存在很大争议(J.Cancer,2012,3:432-448)。

Cel-miR-39是最早被发现的一批线虫miRNA之一(Science,2001,294:858-62)。由于线虫与哺乳动物在遗传上差距太大，cel-miR-39序列在哺乳动物等高等动物基因组内不存在，其对哺乳动物生命过程也不产生影响。因而在哺乳动物miRNA检测过程中，外加人工合成的cel-miR-39作为外源参照是目前控制样本间实验误差的一种可靠做法。

实时荧光定量PCR检测是一种通用的基因定量检测方法，它在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，而不需要取出PCR产物进行分离。实时定量PCR灵敏度高，通用性好，可重复性强，特别适用于大通量检测，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。

发明内容

本发明的一个目的是提供检测miR-197表达量的物质的新用途。

本发明提供了检测miR-197表达量的物质在制备诊断或辅助诊断待测患者是否为肝癌患者的产品中的应用。

本发明还提供了检测miR-197表达量的物质在制备检测或辅助检测肝癌的产品中的应用。

上述应用中，所述miR-197的核苷酸序列如序列表中序列1所示。

上述应用中，所述检测miR-197表达量的物质为如下a)或b)或c)：

a)扩增所述miR-197的引物；

b)含有所述a)的PCR试剂组；

c)含有所述a)或所述b)的试剂盒。

上述应用中，所述引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链DNA分子组成。

本发明的另一个目的是提供一种检测miR-197表达量的物质。

本发明提供的检测miR-197表达量的物质为如下1)或2)：

1)诊断或辅助诊断待测患者是否为肝癌患者的产品；