[发明专利]防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法

说明书

本发明提供了一种防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法，该方法包括：1）挑取经过在固体培养基上培养后的解淀粉芽孢杆菌Bam22菌落，置于液体培养基中，于30‑32℃震荡培养10‑12小时，转速为200‑220 rpm，作为种子液；2）将步骤1）所得种子液接入发酵罐中进行发酵40‑50小时，种子液接入量为8%‑10%，罐温为27‑30℃，发酵罐搅拌速度为220‑250rpm，空气流量0.8﹕1‑1﹕1（V/V•m）；所述高效十字花科根肿病芽孢杆菌Bam22于2015年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11329。本发明的发酵方法对芽孢杆菌Bam22的培养十分有利，获得的细菌数多，且细菌具有良好的活性。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法。

背景技术

仅几十年来，十字花科根肿病在全球范围内迅速蔓延，严重影响了十字花科作物的生长，造成了巨大的经济损失。

鉴于使用化学农药对环境有害且存在食品安全隐患，生防技术日益受到研究者和农业从业者的青睐。然而，由于十字花科根肿病菌不能离体培养的特性在一定程度上限制了该病生防菌株的筛选，因此现有的对十字花科根肿病有较好防治功效的菌株只有寥寥几种，严重的限制了生防方法在十字花科根肿病防治工作的进一步开展。

本发明的发明人经过大量的实验摸索研究，获得了一株对十字花科（特别是油菜）根肿病具有高效防治功效、且施用剂量少的生防菌株，于2015年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11329。将其更好的应于于实际防治工作中，需要对其发酵培养方法进行摸索。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1）挑取经过在固体培养基上培养后的解淀粉芽孢杆菌Bam22单菌落，置于液体培养基中，于30-32℃震荡培养10-12小时，转速为200-220 rpm，作为种子液；所述液体培养基的成分按质量百分数计包括：酵母提取物0.2-0.3%、牛肉浸膏0.1-0.2%、蛋白胨0.7-0.8%、NaCl 0.3-0.6%、余量为水，pH=7.0-7.2；

2）将步骤1）所得物置入发酵罐中进行发酵40-50小时，罐温为27-30℃，发酵罐搅拌速度为220-250rpm，空气流量0.8﹕1-1﹕1（V/Vm）；发酵罐中的培养基的成分按质量百分数计包括：豆粉4-5%、蛋白胨0.1-0.15%、葡萄糖0.5-0.7%、淀粉2-3%、硫酸锰0.1%、硫酸亚铁0.06%、磷酸氢二钾0.2%、碳酸钙0.1%、消泡剂0.01%、余量为水，pH=7.0-7.4；

所述高抗十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Bam22于2015年9月6日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11329。

本发明提供的发酵方法能够很好的对解淀粉芽孢杆菌Bam22进行发酵培养，使得该生防菌具有十分优良的活性，易于开展十字花科根肿病的防治工作。

优选的，所述方法在步骤1）之前还包括步骤：试管种的培养，所述试管种的培养方法为：将解淀粉芽孢杆菌Bam22置于斜面培养基中于30℃下培养36小时；所述斜面培养基的成分按质量百分数计包括：酵母提取物0.2-0.3%、牛肉浸膏0.1-0.2%、蛋白胨0.7-0.8%、NaCl 0.3-0.6%、琼脂2%，余量为水，pH=7.0-7.2。

优选的，所述步骤1）中，所述液体培养基的成分按质量百分数计为：酵母提取物0.25%、牛肉浸膏0.12%、蛋白胨0.75%、NaCl 0.5%、余量为水，pH=7.2。