[发明专利]对亲水气单胞菌O13，O36，O16和O19特异的核苷酸及应用

说明书

本发明涉及一种对亲水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)O抗原特异的核苷酸及其应用，所述核苷酸包括1）SEQ ID NO:1‑8所示的核苷酸中的至少一种；2）与SEQ ID NO:1‑8所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。这些核苷酸可用于制备检测亲水气单胞菌用PCR试剂盒和基因芯片。本发明的对亲水气单胞菌O抗原特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒、基因芯片的实用性强，PCR试剂盒配制方法简便，检测周期短、速度快，可操作性强，易于产业化生产，而检测成本却相对较低；准确性高；灵敏度高。

技术领域

本发明涉及对亲水气单胞菌O13，O36，O16和O19血清型特异的核苷酸，尤其涉及对亲水气单胞菌O13，O36，O16和O19血清型O抗原基因簇中单个基因特异的核苷酸及其应用。

背景技术

亲水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于弧菌科气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，没有芽孢和荚膜，又名嗜水气单孢菌。亲水气单胞菌广泛存在于自然界众多水体中，是多种水生动物的原发性致病菌。为条件性致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病病原菌。它通过肠道进入机体，可以产生毒性很强的外毒素，引起暴发性出血病。一般情况下，菌体对肠道组织的粘附力越强，其产生的外毒素的毒性就越强。亲水气单胞菌的血清型很多，症状也各异，由亲水气单胞菌感染的疾病一般病情严重，多位恶性传播，死亡率较高。

细菌分型与鉴定方法主要有传统的表型方法、血清学方法以及分子鉴定方法。然而，随着分子生物学的发展，传统的血清分型和鉴定方法存在着一定的问题，如血清分型这种诊断方法需要大量的抗血清，而抗血清一般种类不全，数量不足，大量的抗血清在制备和储存中也存在一些困难。另一方面血清分型方法耗时长、灵敏度低、漏检率高、准确性差，不同的O抗原产生的抗血清之间经常存在交叉反应。因此，建立基于分子生物学技术的血清鉴定方法成为发展方向。

亲水气单胞菌的分子鉴定越来越受到人们的重视，成为亲水气单胞菌菌种与株型鉴定的重要依据，不少新菌也因此产生。对弧菌而言，生化反应主要是各种酶谱的表现，属于外部形态的内容，核酸的相似性才是弧菌种的界定最根本、最直接的特征。因此，亲水气单胞菌的分型与鉴定最有效、最直接的方式应该从核酸的研究触发，通过比较核酸（包括基因组与核酸片段）的相似性确定亲水气单胞菌的归属。

近年来，越来越多的分子技术用于病原菌的分型、鉴定、检测及病害诊断，包括转录间隔区(ITS)序列分析、随机扩增长度多态性(RAPD)分析、核糖体DNA限制性片段长度多态性(RFLP)分析等。分子生物学方法不仅可用于亲水气单胞菌的快速血清分型筛查，稳定的鉴定结果可以弥补表型特征鉴定方法的不足。和传统检测技术相比，这些基于多聚酶链式反应(PCR)的分子检测技术，不需要经过病原菌的分离、纯培养等过程，而且具有快速、灵敏、特异性强等优点。

聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction,简称PCR技术)作为微生物检测技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的预增菌或增菌过程，再通过离心及裂解制备细菌DNA模板，就可以在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，达到检测样品中是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需1个半小时。这对检验检疫部门和临床检验无疑极大提高了工作速度和降低了工作成本。

不论从国内和国际的角度来看，快速、准确地鉴定出血清类型，为亲水气单胞菌的防控提供有效技术支持是十分重要的。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种对亲水气单胞菌O抗原特异的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸具有：

1）SEQ ID NO:1-8所示的核苷酸中的至少一种；

2）与SEQ ID NO:1-8所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种；所述的SEQ IDNO:1-8如下：