[发明专利]一种中国人口腔黑色素瘤细胞系COMM-1及其建立方法有效
申请号: | 201510732443.4 | 申请日: | 2015-10-30 |
公开(公告)号: | CN105462928B | 公开(公告)日: | 2019-04-02 |
发明(设计)人: | 张雁;黄林旋;汪华;贺姮 | 申请(专利权)人: | 中山大学 |
主分类号: | C12N5/095 | 分类号: | C12N5/095;C12Q1/02;C12R1/91 |
代理公司: | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人: | 华辉 |
地址: | 510006 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 中国人 口腔 黑色素瘤 细胞系 comm 及其 建立 方法 | ||
本发明公开了一种中国人口腔黑色素瘤细胞系COMM‑1,所述中国人口腔黑色素瘤细胞系COMM‑1保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏号为CCTCC:C201586,其保藏日期为2015年6月8日。本发明的有益效果为:本发明建立了中国人口腔黑色素瘤细胞系COMM‑1,并用该细胞系实现了肿瘤干细胞的富集,为研究人中国人口腔黑色素瘤的特性及其治疗药物提供了物质基础。
技术领域
本发明属于细胞工程领域,具体涉及一株中国人口腔黑色素瘤细胞系COMM-1及其建立方法。
背景技术
1.1口腔黑色素瘤的发病及预后
恶性黑色素瘤源于神经脊细胞,是侵袭性最强的恶性肿瘤之一。原发性口腔黑色素瘤是一种罕见疾病,约占口腔恶性肿瘤0.5%及口腔活检组织0.01%。该疾病多发于41-60岁之间,男女比例为2:1,患者在患病初期未见明显症状,大部分口腔黑色素瘤在确诊时已进入晚期,可见肿瘤块大于4mm。口腔黑色素瘤严重影响患者味觉,预后较差,5年生存率仅为15-20%。
1.2细胞系的建立
建立肿瘤细胞系是研究肿瘤致关重要的环节。细胞系广泛应用于生物学各个研究领域。它是指直接从生物体的组织中分离培养出细胞,为后续研究提供稳定细胞系的一种方法。细胞系是研究特定细胞的生长、代谢、调控特性,细胞与细胞间相互作用,细胞与基质的相互作用等有效的研究材料。人类的第一株连续细胞系是1951年由George Otto Gey实验室建立的子宫颈癌细胞系(Hela),这株细胞系的建立是人体细胞体外培养的里程碑,Hela细胞推进了细胞、基因、病毒、疫苗等许多研究领域的进程,也加深了人们对肿瘤的认识:发现肿瘤的各种特性、研究肿瘤发生发展的原因和过程、筛选抗癌药物等。
除了研究细胞本身的特性和癌症的发生发展外,还应用于遗传、免疫、分化、发育的研究领域。此外,国内外不少企业还可以利用细胞进行生产各种因子、蛋白等。细胞的广泛应用推动了细胞生物学的蓬勃发展。
原代培养主要有机械法和酶消化法。机械法主要是利用物理剪切,直接将组织剪碎,然后将这些组织小块贴壁培养的方法。酶消化法是应用适当的酶裂解组织从而分离出单细胞,直接悬浮或贴壁培养的方法。用于消化的酶主要有:胰蛋白酶、胶原酶、链酶蛋白酶、透明质酸酶等。
癌细胞的体外建系难度较大,一是要有效预防和去除支原体、霉菌及细菌等的污染;二是要保证细胞生存环境如血清,培养基,生长因子等的质量;三是有效控制纤维细胞的生长;四是必须控制好前10代细胞的传代与保种。虽然70年代Moore等相继建立了HT-144Melanoma,RPMI-7951等黑色素瘤细胞系,但来源不同的黑色素瘤其生物学特性各异,且这些细胞系在体外生存时间过长,其生物学特性与体内实体瘤相比较有较大差异,难以客观反映体内实体瘤的情况,因此,建立体外培养的黑色素瘤细胞系,能为基础研究与临床治疗提供丰富的实验材料,对于探讨其发病机制,寻找新的治疗手段意义重大。
1.3黑色素瘤干细胞的研究
近年来随着对肿瘤研究的不断进展,针对一些复发肿瘤和对放射性、化学治疗不敏感提出了肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)的概念,该学说认为肿瘤细胞具有异质性,同一肿瘤中,大部分细胞高分化的细胞已经失去了生长分化潜能,只有一小部分细胞具有无限增殖、分化和体外克隆的能力。
区分CSC的基本特点主要包括:一是将肿瘤移植到免疫缺陷小鼠时,肿瘤中只有很少一部分细胞是肿瘤干细胞,较少的癌细胞就能使小鼠致瘤。二是CSC与非CSC可通过独特的细胞表面标志物用流式的方法富集细胞。三是CSC具有自我更新能力可以通过多代的连续传代和移植实验证实。
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