[发明专利]一种室内水稻品种稻瘟病抗性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种室内水稻品种稻瘟病抗性鉴定方法，首先室内进行喷雾接种，在感病对照丽江新团黑谷发病的情况下，表现感病的品种作好分级记录并结束试验；表现抗病的品种重新育苗，然后进行室内离体叶段点液接种，表现感病的品种作好分级记录并结束试验；表现抗病的品种重新育苗，再进行点液接种，病情稳定后及时记录发病情况。这揉合三种接种方法的一套抗性筛选技术，既避免了单一接种方法的不足，又节约了人为和物力，最终能够真实地表现一份水稻品种的室内抗稻瘟病能力，试验结果可以为大田推广品种、品种抗性基因的挖掘等奠定稳定可靠的基础。

技术领域

本发明属于农业技术领域，具体地说，涉及一种室内水稻品种稻瘟病抗性鉴定方法。

背景技术

水稻是全球尤其是亚洲地区重要的粮食作物，而由子囊菌引起的稻瘟病(Magnaporthe oryzae)是影响水稻安全生产的主要病害之一，加上稻瘟病在实际防治上的复杂性、分布的广泛性以及危害的严重性，因此稻瘟病一直受到各地政府和研究者的高度关注。

湖北省地处长江中下游，地貌复杂，省内既有高山又有丘陵、平湖。水稻一直是湖北省种植面积最大、总产最多的农作物，播种面积占全省粮食总播种面积的50％以上，总产占70％左右，商品量占80％，而且湖北水稻在种植面积、总产、单产、优质稻种植面积等方面多年来一直稳居全国各省市水稻生产的前列。稻瘟病在全省各稻区均可发生，发生面积达300～600万亩，占整个水田面积的11％～22％，病害流行的年份造成当地颗粒无收。病情的普遍性和严重性影响着湖北省水稻生产的产量和质量，严重制约了水稻育种产业化进程，严竣的病害现实和惨痛的历史教训，让人们在考察一份水稻材料是否适宜推广应用时不得不把是否抗稻瘟病作为其必备的前置优良品质。利用抗病品种抵抗稻瘟病的流行是行之有效的安全措施，而在实际生产中，单一的抗病品种在长时间大面积种植后抗性表现为丧失，造成稻瘟病的流行和暴发，因此不断地寻找新的抗源材料是水稻育种和抗病研究者长期的科研任务。

抗病品种在大田生产中表现为抗性，其中一个基础前提是鉴定的结果稳定可靠。利用大田自然诱发技术鉴定水稻品种(材料)的抗瘟性是目前一个稳定可靠的鉴定技术，但是大田自然诱发的鉴定结果需历时数月且对当年的天气情况有要求，因此在追求效率的当下，在室内对水稻品种(材料)采用一套操作简单、结果稳定的技术，鉴定其对稻瘟病的抗性、继而将抗病品种(材料)作为抗源材料用于科学研究或生产实践尤其显得重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种室内水稻品种稻瘟病抗性鉴定方法，其试验结果可以为大田推广品种、品种(材料)抗性基因的挖掘等奠定稳定可靠的基础。其具体技术方案为：

一种室内水稻品种稻瘟病抗性鉴定方法，包括以下步骤：

1)采用孢子振落法分离稻瘟病菌单孢：先将穗颈瘟标本置于无菌水中浸泡48h，后移至培养皿中保湿培养48h使之产孢，培养皿中预先放有浸有无菌水的吸水纸，吸水纸一端作成纸枕，使标本两端接触吸水纸、病斑部分悬空，温度26℃，光：暗＝12h：12h；当病斑部分出现一层灰绿色细密孢子，用洗耳球将孢子轻轻吹落于事先准备好的清水琼脂培养基上，进行镜检，把视野中的单个孢子打好标记，挑取标记部位的琼脂置于PDA上使之萌发生长；将分离出的单孢菌株转入保存培养基中，并置于4℃冰箱中保存备用；

2)采用涂菌产孢法制备孢子悬浮液：将保存的各单孢菌株活化于PDA斜面上，从边缘挑取1cm大小的菌丝块转接于OTA平板上，待菌盖扩展至培养皿面积70％左右时，用无菌水洗下培养皿上的菌丝，洗下的菌液涂布于另一番茄燕麦培养基平板上，48h后用无菌水打断皿中长出的气生菌丝，自然晾干后以洁净的纱布覆盖，置于光照培养箱中紫光灯48h促其产孢；用无菌水洗下孢子，过滤、搅匀，加入0.025％Tween-20通过血板计数器将孢子悬浮液的孢子浓度调整为5×10⁵个孢子/ml；