[发明专利]一种多功能木霉菌株LY3及其菌剂制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及木霉技术领域，具体涉及一种多功能木霉菌株LY3及其菌剂制备方法。

背景技术

近年来随着植物病害的抗药性日趋严重，化学农药使用数量成倍增加，对环境污染日渐凸显，我国农业生态环境、资源均受到极大破坏。人们对可持续农业的呼声越来越高。农业的可持续发展问题已是当务之急。利用生物农药来防治植物病害是有效的方法之一。

木霉(Trichoderma)是防治植物病害的重要拮抗真菌。曾成功防治辣椒白绢病和猝倒病、黄瓜枯萎病和白粉病、辣椒疫病等多种病害。国内外已有商品化注册登记的木霉产品应用于田间。但是，同时具备抗菌、抗化学农药、固氮、解磷、降解纤维素5种功能于一身的菌株尚未见报道。本发明涉及一株具备上述5种功能的木霉菌株固体发酵各种参数选择，包括适合的碳源、氮源、pH、温度、光照等影响其菌体生长的各项因素。最终选择一种廉价的固体发酵基质，为其工业生产提供技术参数。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提供了一种具备广谱抗植物病原真菌的同时，兼具抗化学农药、固氮作用、降解难溶磷酸盐及纤维素的多功能木霉菌株LY3。并提出了一种多功能木霉菌株菌剂制备方法，工艺简单，所得菌剂环境友好。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一株多功能木霉，编号为LY3，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年7月23日，分类命名为Trichodermakoningii，保藏号为CGMCCNo.11125。

该木霉在PDA培养基上菌落丝状；分生孢子梗大多单侧分枝，分枝角度近似90°；瓶梗直或弯曲，2～3个轮状排列，中部膨大，顶端和基部缢缩，7.5～13.8×2.5～4.5μm；分生孢子绿色、大多椭圆形，少数近球形或卵圆形，光滑，3.8～6.3×2.5～4.5μm。菌丝生长适合的培养基为PDA，D-果糖为碳源，蛋白胨为氮源，温度15～30℃，酸碱度pH3～pH10，光照及湿度不影响其菌丝生长；促进产孢的培养条件为光暗交替，28℃，pH5；孢子致死温度为52℃。

本发明提供了该多功能木霉LY3菌株的菌剂生产方法，具体包括以下步骤：

1)将LY3木霉菌株在PDA培养基上28℃培养5d，用灭菌蒸馏水冲洗孢子，制成孢子液(1×10⁶个/mL)备用；

2)发酵基质选配及灭菌：米糠作为发酵基质，其中按质量分数添加0.5％D-果糖、1％蛋白胨、0.5％磷酸氢二钠、40％自来水，121℃高压灭菌30min，冷却备用；

3)接种与发酵：将步骤1)准备好的孢子液以7％的比率接种于步骤2)准备好的基质中，30℃、光暗交替、静止培养11d。

优选地，发酵基质为米糠。

优选地，碳源为D-果糖。

优选地，氮源为蛋白胨。

优选地，无机盐为磷酸氢二钠。

优选地，1×10⁶个/mL孢子液7％。

优选地，培养温度为26～30℃，培养时间为11d。

本发明选用具有抗化学农药、抗菌、固氮、解磷、降解纤维素5种功能于一身的木霉菌株，使木霉抗土壤中残留的化学农药，易在土壤中成功定殖，对田间植物病原菌产生抑制作用，固定空气中的氮素，降解土壤中难溶的磷酸盐及纤维素供其植物生长，起到药肥两用的功效。获得最大的经济及生态效益。本发明工艺简单，所得菌剂环境友好。具有广阔的市场前景。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。

实施例1木霉菌株分离

取1个月生健康黄瓜苗茎基部，切成5mm茎段，70％酒精表面消毒1min，0.1％升汞消毒40s，无菌水漂洗3次，用灭菌滤纸吸干茎段表面的水，接种于PDA培养基中，28℃恒温培养3d，待长出白色菌丝，取菌落边缘的白色菌丝纯化3次，得到木霉菌株命名为LY3，斜面试管保藏备用。

实施例2木霉菌株LY3形态鉴定