[发明专利]检测高密度脂蛋白胆固醇含量的试剂盒

说明书

本发明公开一种检测高密度脂蛋白胆固醇含量的试剂盒，采用优化浓度和比例的聚乙烯硫酸三钾(polyvinylsulphate K‑salt,PVS)和聚乙二醇独甲醚(Methoxypolyethylene glycol，PEGME)，联合对高密度脂蛋白胆固醇反应性较好的表面活性剂进行特异性的高密度脂蛋白胆固醇的含量测定。本发明的技术方案中均无需标本前处理即沉淀和离心，可以直接在自动生化仪测定标本中的高密度脂蛋白胆固醇。

本申请是申请号为200910117837.3，申请日为2009年3月6日，发明名称为“高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇定量法”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及对高密度脂蛋白胆固醇的改良测定方法及相关试剂盒。

背景技术

血浆中胆固醇的存在和运输形式为血浆脂蛋白，即血浆中非极性的脂类包括胆固醇和亲水性的载脂蛋白结合，使得脂蛋白有较强的水溶性可以在血中运输。血浆脂蛋白可以分为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜颗粒四种，其中低密度脂蛋白主要负责将胆固醇运输至外周组织，而高密度脂蛋白是清除动脉壁上的胆固醇向肝脏运输。流行病学和临床研究表明，低密度脂蛋白胆固醇水平与动脉硬化类疾病冠心病的发生率成正相关，高密度脂蛋白胆固醇与动脉硬化类疾病冠心病的发生率成负相关，即具有抗动脉硬化活性。因此高密度脂蛋白胆固醇HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇LDL-C是当前临床实验室血脂测定中最有价值的心脑血管疾病的危险因素指标。

测定高低密度脂蛋白胆固醇的方法很多，包括超离心法、色谱法、电泳法和沉淀法等。超离心法可作为基本的定量法使用，它使用超速离心机进行分离，根据比重的差别分离LDL或HDL，进而测定其中的胆固醇含量；而后来发展的电泳法以醋酸纤维膜或琼脂糖凝胶等做载体分离，然后根据酶法测定胆固醇含量；在沉淀法中，沉淀剂凝结除高密度脂蛋白以外的脂蛋白，凝结的脂蛋白通过离心分离沉淀，根据酶反应测定上清即高密度脂蛋白胆固醇的含量；测定低密度脂蛋白胆固醇的第一代化学沉淀法，采用PVS和PEGME沉淀LDL，用离心分离法收集沉淀物，然后根据酶反应测定其中的胆固醇含量；以上方法均需要特殊仪器，包括超速离心机、电泳仪和离心机等，操作复杂，难于自动化，从而无法在临床实验室开展。

发明内容

本发明所涉及的直接测定高密度脂蛋白胆固醇的方法，是用优化的聚乙烯硫酸三钾PVS化学沉淀法联合对高密度脂蛋白胆固醇反应性较好的第一表面活性剂，采用优化浓度的聚乙烯硫酸三钾(PVS)和聚乙二醇独甲醚(PEGME)联合其他化合物将HDL以外的脂蛋白胆固醇包裹不溶于水但又不至于沉淀，在对高密度脂蛋白胆固醇反应性较好的第一表面活性剂的作用下溶解高密度脂蛋白胆固醇利用酶反应测定其中胆固醇的含量。本方法所涉及的直接定量低密度脂蛋白胆固醇的方法，采用优化的PVS沉淀法，仅包裹LDL使其无法参与酶反应，但不会沉淀LDL即形成不溶物，然后LDL中的胆固醇成分在第一和第二表面活性剂的联合作用下直接测量；详细而言，即高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和乳糜微粒中的胆固醇在对低密度脂蛋白以外的脂蛋白胆固醇反应性较好的第一表面活性剂的作用下参与胆固醇脂酶反应，低密度脂蛋白胆固醇在第二表面活性剂的作用下溶解释放以进行酶反应法测定其胆固醇含量。酶反应中第一步产生的过氧化氢不必使用过氧化物酶去除，所以在第二步中不必加入抑制过氧化物酶活性的叠氮钠。本发明中可以使用生物防腐剂。本发明的方法中均无需标本前处理即沉淀和离心，可以直接在自动生化仪测定标本中的高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。