[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫O型病毒的单克隆抗体与应用

权利要求书

1.以口蹄疫O型O/Mya98/BY/2010病毒为免疫原免疫小鼠获得的持续、稳定分泌抗口蹄疫O型O/Mya98/BY/2010病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F2，保藏编号为CGMCCNo.10896。

2.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1F2 CGMCC No.10896分泌的单克隆抗体1F2anti，其重链可变区的氨基酸残基序列由序列表中的SEQ ID No：1所示，轻链可变区的氨基酸残基序列由序列表中的SEQ ID No：2所示。

3.编码权利要求2所述单克隆抗体1F2anti的基因，其重链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQ ID No：3的DNA序列所示，其轻链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQID No：4所示。

4.一种检测口蹄疫O型O/Mya98/BY/2010病毒的ELISA试剂盒，包括权利要求2所述单克隆抗体1F2anti。

5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，包括用1F2anti作为包被抗体包被的微孔板和用1F2anti作为酶标抗体的酶标记抗体工作液；

所述用1F2anti作为包被抗体包被的微孔板指的是用10mM pH7.0-7.4PBS将1F2anti稀释成0.5-10μg/mL，加入微孔板中，110μl/孔，置于2-8℃过夜；拍干后，加入含1％BSA的10mMpH7.0-7.4PBS，300μl/孔，置于2-8℃过夜；拍干、干燥后真空装入铝箔袋中备用；

所述酶标抗体可用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记酶标记抗体，然后用酶标记抗体稀释液稀释成工作液，工作液的浓度为0.1-1.0μg/mL；酶标记抗体稀释液配方为：Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，NaH₂PO₄·2H₂O 0.296g，NaCl 8.5g，Proclin 300 0.6mL，BSA 10g，胎牛血清150mL，酶稳定剂5g，Tween-20 0.25mL，用双蒸水定溶至1000mL，调整pH值至7.6-7.8。

6.权利要求4或5所述试剂盒的使用方法，用于对口蹄疫O型O/Mya98/BY/2010病毒的ELISA检测，是用权利要求2所述单克隆抗体1F2anti作为包被抗体及酶标抗体的双抗夹心ELISA检测，包括以下步骤：

1)用单克隆抗体1F2anti包被96孔微孔板并封闭；

2)加待测样品，洗板；所述样品为疫苗；

3)加用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记的单克隆抗体1F2anti，洗板；

4)加底物显色；

5)终止反应；

6)测定OD₄₅₀值。

7.一种检测口蹄疫O型O/Mya98/BY/2010病毒的金标纸层析试纸，由玻璃纤维膜样品垫、结合物释放垫、吸水垫、硝酸纤维素膜组成，硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于：

用浓度为1-5mg/mL的单克隆抗体1F2anti包被检测线；用浓度为1-5mg/mL的羊抗鼠免疫球蛋白包被质控线；结合物释放垫上包被有胶体金标记的特异性单克隆抗体1F2anti；所述单克隆抗体1F2anti如权利要求2所述。