[发明专利]一种柞蚕Yippee基因及其多克隆抗体的制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是基因工程技术领域，尤其涉及的是一种柞蚕Yippee基因及其多克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

柞蚕属于鳞翅目、大蚕蛾科、柞蚕属的野生绢丝昆虫其茧丝的产量仅次于家蚕，主要分布区域分别在中国、印度和韩国，其主要价值体现在可以作为纺织工业原料利用，而且具备很高的药用和食用等经济价值，可用于补充人体所必需的氨基酸，具有可大规模饲养以及个体大等优点，可以作为生物反应器生产医用药物和有用蛋白。因此，对其开展功能基因的研究，对于保护和开发柞蚕的基因资源具有重要意义。

当前，柞蚕产业发展的重要课题包括利用生物技术手段提高柞蚕产量、茧丝品质以及开发一些高附加值的柞蚕生物新产品，而柞蚕功能基因的克隆和鉴定则是柞蚕生物技术的重要研究内容，是柞蚕种质资源的改良和利用以及柞蚕生物反应器研究的基础。对柞蚕的功能基因研究从上世纪90年代开始，已经取得一些进展，但相比于家蚕的研究进展两者仍差距较大。随着柞蚕病虫害对农药的抗性、适应性增强，在生产上就迫切需要应用新的技术来有效控制其危害。因此柞蚕研究的重要方向是针对柞蚕主要病虫害开展新药剂以及综合防控技术的研究。

目前关于柞蚕免疫机理研究报道很少，这些病原导致的病害每年给养蚕农户带来了很大的经济损失，因此通过提高其自身的免疫功能来提高柞蚕的生产产量将是一件十分有意义的工作。柞蚕作为一种重要的经济昆虫，被病源物侵染的相关研究不多，为了更好地了解病原物感染后柞蚕的应答机制，也为培育高抗病性柞蚕品种提供理论依据。因此，研究对柞蚕先天免疫防御相关基因的研究对于提高柞蚕蚕抗病能力具有重要的理论意义。蚕病在蚕业生产成为一大害，每年造成的损失巨大。致病微生物给柞蚕的生长发育形成了巨大的威胁，也给柞蚕的养殖带来了很大的威胁，主要原因是首先病原微生物本身的致病性强致死率高，其次柞蚕本身作为鳞翅目昆虫只有先天免疫系统而没有获得性免疫系统，那么怎样提高柞蚕自身免疫能力从而抵抗病原微生物的侵染，提高蚕丝产量，减少损失，就越来越成为大家研究的重点。柞蚕免疫相关基因的研究对于推进鳞翅目其他昆虫相关研究也具有重要意义，也可为鳞翅目害虫的防治提供借鉴。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种柞蚕Yippee基因及其多克隆抗体的制备方法和应用，以提供一种新的Yippee基因。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种柞蚕Yippee基因，该Yippee基因具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，或具有与SEQIDNO.1所示序列互补的核苷酸序列，该Yippee基因是从柞蚕中克隆获得的，也可通过人工合成方式获得。

本发明还提供了上述柞蚕Yippee基因在参与柞蚕免疫应答反应中的应用。

本发明还提供了一种兔抗柞蚕Yippee多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)将上述柞蚕Yippee基因导入原核表达载体上，获得重组载体；

(2)将步骤(1)的重组载体转化至原核表达系统中进行蛋白诱导表达，然后分离纯化蛋白，获得重组蛋白；

(3)将步骤(3)的重组蛋白注射大白兔，收集兔血清，获得所述兔抗柞蚕Yippee多克隆抗体。

进一步优选地，所述步骤(1)的原核表达载体为Pet-28a+表达载体，所述步骤(2)的原核表达系统为大肠杆菌表达系统。

进一步优选地，所述步骤(2)中，分离纯化蛋白的方法为镍柱纯化。

本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种柞蚕Yippee基因及其多克隆抗体的制备方法和应用，该柞蚕Yippee基因为一种新的Yippee基因，其直接参与柞蚕的免疫应答反应，对于提高柞蚕自身免疫能力从而抵抗病原微生物的侵染，提高蚕丝产量，减少损失等具有重要意义。该基因对于推进鳞翅目其他昆虫相关研究也具有重要意义，也可为鳞翅目害虫的防治提供借鉴。

附图说明

图1为Yippee基因的琼脂糖凝胶电泳鉴定图；

图2为纯化的重组蛋白检测结果，其中：A为聚丙烯酰胺电泳检测结果图，B为Westernblot鉴定图；

图3为不同微生物刺激后Yippee基因表达水平变化qRT-PCR检测图；

图4为不同微生物刺激后Yippee蛋白表达水平变化WesternBlot检测图。

具体实施方式

实施例1

1、材料