[发明专利]一种直接对miRNA进行绝对定量检测的方法有效
| 申请号： | 201510740984.1 | 申请日： | 2015-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN105331695B | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | 徐凯;唐放;张耀艺;罗德伦;杨莉 | 申请（专利权）人： | 成都诺恩基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683 |
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| 地址： | 610041 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 直接 mirna 进行 绝对 定量 检测 方法 | ||
1. 一种非诊断目的的直接对miRNA 进行绝对定量检测的方法，其中采用miRFLP 法，其步骤包括：将待测miRNA 样本与动态miRNA 标准混合均匀，然后经过miRNA 逆转录、cDNA加尾、PCR 同步扩增及PCR 扩增产物的荧光片段长度多态性分析，其特征在于：先对待测miRNA样本进行预处理, 所述预处理方式为采用质量百分浓度10％的二甲基亚砜室温20℃孵育，或采用质量百分浓度90％的二甲基亚砜50℃加热处理，所述待测miRNA样本来自血浆，所述待测miRNA 样本经过所述预处理后，不经过RNA 提取，直接进行检测；并且在所述cDNA加尾步骤中，对适配寡聚核苷酸链3’末端进行修饰，所述对适配寡聚核苷酸链3’末端进行修饰的方法为碳链修饰或增加一个与所述适配寡聚核苷酸链序列相同的寡聚核苷酸链，以阻止适配寡聚核苷酸引发的多聚反应。
2.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：对miRNA 逆转录产物及PCR 反应物进行富集。
3.根据权利要求2 所述的方法，其特征在于：富集时采用生物素-琼脂糖链霉素偶联试剂或链霉素磁珠。
4.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：所述待测miRNA 样本预处理后加入细菌RNA，然后进行检测。
5.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：在-20℃保存待测miRNA 样本时，加入10％的二甲基亚砜。
6.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：所述miRNA 逆转录过程中，采用的引物为经过生物素标记的欧米伽引物。
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