[发明专利]一种葱鳞葡萄孢菌的快速检测方法及应用

权利要求书

1.一种葱鳞葡萄孢菌的快速检测方法，其特征在于，所述方法主要包括以下步骤：

(1)设计检测所述葱鳞葡萄孢菌的特异性引物为：采用RAPD和SCAR相结合的方法，设计一对能够特异性检测的引物，所述引物如以下SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示：

上游引物5’-CTCCGAGGAATGTAGCAATG-3'(SEQIDNO.1)；

下游引物5'-CTCAAAGGCCAACCATACAG-3'(SEQIDNO.2)；

(2)提取对待检样品的总DNA；

(3)以待检样品DNA为模板，用所述葱鳞葡萄孢菌特异性引物进行PCR聚合酶链式反应；

(4)将得到的PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，经GoldenView染色后，在凝胶成像系统下进行分析，以是否具有301bp的葱鳞葡萄孢菌的特异性扩增产物，判断对应的待检样品是否受到葱鳞葡萄孢菌的侵染。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述PCR反应体系包括：2×TiandzTaqPCRmix10μl，DNA10-20ng，上下游引物各0.5μl，ddH₂O补齐至20μl。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述PCR扩增条件为：第一循环94℃预变性5min；第二循环94℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸30sec，共30个循环；第三循环72℃终止延伸7min。

4.一对用于特异性检测葱鳞葡萄孢菌的引物，其特征在于，

所述引物如以下SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示：

上游引物5’-CTCCGAGGAATGTAGCAATG-3'(SEQIDNO.1)；

下游引物5'-CTCAAAGGCCAACCATACAG-3'(SEQIDNO.2)。

5.一种用于特异性检测葱鳞葡萄孢菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如以下SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示的引物：

上游引物5’-CTCCGAGGAATGTAGCAATG-3'(SEQIDNO.1)；

下游引物5'-CTCAAAGGCCAACCATACAG-3'(SEQIDNO.2)。

6.如权利要求1所述的检测方法在葱鳞葡萄孢菌的鉴别或葱蒜类蔬菜作物的田间和采后灰霉病的诊断和预警中的应用。