[发明专利]HIB综合培养基、B型流感嗜血杆菌结合疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗生产制备工艺技术领域，具体涉及一种HIB综合培养基、B型流感嗜血杆菌结合疫苗及其制备方法。

背景技术

流感嗜血杆菌(HaemophilusInfluenzae，HI)是一种革兰氏阴性短小杆菌，是引起小儿呼吸系统原发性感染和病毒性疾病时继发感染的重要致病菌。通常有荚膜型和非荚膜型两大类。按其荚膜多糖抗原的特异性可分为a-f六个血清型和一组不可分型的流感嗜血杆菌。其中b型流感嗜血杆菌的致病性最强，f次之，可引起多器官、组织的侵袭性感染。从发达国家的流行病学资料可知，b型流感嗜血杆菌引起的脑膜炎约占小儿化脓性脑膜炎的一半左右，且具有发病率高、死亡率高和致死率高的特点。虽然临床上对b型流感嗜血杆菌有多种抗生素可治疗，但由于细菌抗药性不断增加，b型流感嗜血杆菌引起的脑膜炎、肺炎死亡率高，加之在抗生素治疗有效的情况下也不能阻止神经系统后遗症的发生，给临床治疗带来了很大的困难。

b型流感嗜血杆菌的主要致病能力是其表面的荚膜，这个荚膜使细菌具有了抵抗吞噬细胞和防止血清杀菌物质杀菌的能力。b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(CPS)由若干个多聚核糖基核糖醇—磷酸盐(PRP)组成。患b型流感嗜血杆菌感染性疾病后血清中可产生抗特异性CPS抗体。从其血清流行病学可见，b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(CPS)是b型流感嗜血杆菌有效的保护性抗原，理想的疫苗应该是能刺激机体产生抗CPSIgG抗体，其抗体水平≥0.15ug/ml和≥1.0ug/ml，才能分别为婴儿提供短期和长期的免疫保护。

b型流感嗜血杆菌结合疫苗可有效地预防其疾病的发生，显著地降低b型流感嗜血杆菌侵袭性疾病的发病率，保护婴幼儿的健康。目前，现有的b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产工艺，其关键步骤存在工艺复杂、成本较高，并且所制得的b型流感嗜血杆菌结合疫苗不稳定，含有血源性成分且容易发生过敏反应，核酸、蛋白、内毒素含量高；同时，用于培养b型流感嗜血杆菌的培养基均含有血源性成分和大分子过敏原性成分，从而影响疫苗生产安全，另外，现有的用于培养b型流感嗜血杆菌的培养基的组成成分最少为12种，最多可达到14、15种，这无形之中增加了培养基成本，而且成分越多越复杂，可能给b型流感嗜血杆菌结合疫苗带来不利影响。

从已有的医院流行病学监测和人群流行病学报道结果看，虽然b型流感嗜血杆菌引起脑膜炎的发病率较工业化国家低，但b型流感嗜血杆菌也是造成我国婴幼儿下呼吸道急性感染的重要病原菌之一。

发明内容

为了解决现有用于培养b型流感嗜血杆菌的培养基存在的组分多、成本高、含有血源性成分和大分子过敏原性成分以及现有b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产工艺的关键步骤存在工艺复杂、成本较高，并且所制得的b型流感嗜血杆菌结合疫苗不稳定，含有血源性成分且容易发生过敏反应，核酸、蛋白、内毒素含量高的问题，本发明提供一种无血源性成分和大分子过敏原性成分的HIB综合培养基、一种B型流感嗜血杆菌结合疫苗及其制备方法。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的HIB综合培养基，该培养基中各成分及其终浓度为：

酵母浸出粉5～15g/l，

葡萄糖5～15g/l，

MgCl₂·6H₂O1～3g/l，

β-辅酶A0.01～0.03g/l，

氯化血红素0.005～0.02g/l，

Na₂HPO₄·12H₂O22～32g/l，

NaH₂PO₄·2H₂O2～5g/l；

该培养基不含有血源性成分和大分子过敏原性成分。

优选的，该培养基中各成分及其终浓度为：

酵母浸出粉10g/l，

葡萄糖10g/l，

MgCl₂·6H₂O2.03g/l，

β-辅酶A0.02g/l，

氯化血红素0.01g/l，

Na₂HPO₄·12H₂O28.65g/l，

NaH₂PO₄·2H₂O3.12g/l；

该培养基不含有血源性成分和大分子过敏原性成分。