[发明专利]一种上皮组织染色剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于上皮组织尤其是肿瘤组织的染色剂组合物，还涉及该染色剂的制备方法。

背景技术

近年来恶性肿瘤的发病率和死亡率都很高，而死亡率又是和及早诊治息息相关，怎样及早确诊并进行治疗，是近年来医学界研究的热点。目前确认恶性肿瘤主要是一句病理细胞学检查和组织学检查，它们是通过细胞形态和组织结构的改变来作出诊断的。而早期恶性肿瘤病人细胞往往只表现有难以确诊的核酸增加，还没有形态和结构的改变，这就造成细胞学和组织学漏诊的主要原因。目前针对肿瘤细胞的染色检测技术发展迅速，已经有多种染色法可以较为准确的检测出细胞的良恶性程度，常见的有乙酸白化反应，碘实验、吖啶橙荧光染色等。

其中亚甲蓝染色法是近年来发展的一种新型肿瘤染色技术，其利用恶性肿瘤细胞内部一般呈现较强的氧化环境的特点，通过氧化变色来识别恶性肿瘤细胞。亚甲蓝是一种无毒性的生物染色材料，其氧化型是蓝色，还原状态下无色。目前如何提高亚甲蓝染色法的识别度是研究的方向。

临床研究表明，叶酸受体在大多数肿瘤细胞表明更容易集中，而在正常细胞表面则相对较少，所以叶酸可以作为肿瘤特异性靶向分子，用于肿瘤的诊断治疗。在酸性条件下，叶酸和亚甲基蓝分子形成叶酸亚甲基蓝复合物更容易与肿瘤细胞表面的叶酸结合，从而进入肿瘤细胞。遇到肿瘤细胞内部的氧化环境，还原态的亚甲基蓝被氧化发生变色，从而达到识别肿瘤细胞的目的。

CN103483872A涉及一种用于肿瘤组织细胞染色剂组合物，包括显色剂，0.01-5%；叶酸≤6.5%；隐色剂，0.1-10%；pH调节剂≤10%；水，3-95%。其中，显色剂为亚甲基蓝和/或二氯酚靛酚，隐色剂为还原性试剂，靶向药物制剂为叶酸，以及溶液pH调节剂和水。所述用于肿瘤细胞染色的染色剂，也可用于肿瘤细胞的检测，本发明还涉及所述染色剂组合物用于肿瘤细胞检测的方法以及用于检测肿瘤细胞的试剂盒以及检测载体。

CN103808551A公开了一种用于上皮组织病变细胞检测的复合醋酸白溶液诊断试剂配方、制备工艺及棉签；醋酸白溶液组成和配比是100ml溶液中含4%亚甲基蓝、1%的果糖、20%的葡萄糖、5%的维C、0.1-5%的叶酸、5%的蒸馏水、95%二甲基亚砜、1%乙酸。本发明的优点在于利用虹吸原理将复合醋酸特殊染色溶液或体外诊断试剂与医用妇科大棉签巧妙结合于一体结构简单，把棉签和染色剂溶液合为一体，减少医生工作强度、操作简单、使用卫生、方便，储存期长，适用于各类医疗单位作为上皮组织细胞特殊染色和体外诊断特殊染色时使用。

以上现有技术都利用亚甲蓝染色技术识别恶性肿瘤细胞，但是在识别率和准确率上还有待提高。

发明内容

本发明人经过多年研究，在现有亚甲蓝染色识别技术的基础上，发现添加辣根过氧化酶可以显著提高亚甲蓝染色识别的准确度，这可能是因为辣根过氧化酶可以促进肿瘤细胞在细胞内生成氧化物，但是对于正常细胞却不具有促进作用，从而导致亚甲蓝可以发生更显著的变色，并显著提高识别准确度。

本发明人还对常用的叶酸受体进行深入研究，发现了部分叶酸衍生物具有更好的肿瘤细胞特异靶向效果，尤其是5,6,7,8-四氢叶酸、组氨酸N-乙酰-2-乙二酰氨叶酸、半胱氨改性叶酸，和叶酸相比，具有更好的肿瘤细胞选择性，准确率也更好。这在现有技术中也未有记载。

本发明公开了一种上皮组织染色剂，所述组合物按照重量百分比计包括以下组分：叶酸衍生物0.5-15wt%；亚甲蓝0.02-10wt%；辣根过氧化酶0.1-5wt%；氨基半乳糖2-10wt%；N-邻苯二甲酰低聚壳聚糖2-10wt%；医用级冰醋酸2-6wt%；去离子水余量。

所述叶酸衍生物优选为5,6,7,8-四氢叶酸、组氨酸N-乙酰-2-乙二酰氨叶酸、半胱氨改性叶酸中的一种或多种。

所述氨基-半乳糖也可以用葡萄糖替换。

所述上皮组织染色剂的制备方法包括以下步骤：1）将叶酸衍生物溶于含水溶剂中，静置24-36h；2）将亚甲基蓝放入该溶液中搅拌2-5h；3）向该溶液中加入氨基半乳糖和N-邻苯二甲酰低聚壳聚糖；4）将醋酸溶液加入至溶液PH为5-6。

所述染色剂可以用于肿瘤细胞检测的用途。

所述染色剂的载体包括脱脂棉签、微囊、纤维膜、滤纸。