[发明专利]单宁酸作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及化合物的新应用，特别涉及单宁酸作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用。

背景技术

HIV-1病毒是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，它通过攻击人体T淋巴细胞，破坏人体免疫系统，最终导致获得性免疫缺陷综合征艾滋病的产生。该病毒最初发现于1981年，在此之后的三十余年研究人员一直致力于对该病毒控制及清除，从而达到艾滋病的治愈。目前的常规治疗方法为简称HAART的高效抗逆转录病毒治疗，该治疗方法能够有效的抑制病毒的复制，从而将病人外周血中的病毒载量控制到较低的水平。但是目前的通用治疗方法只能够在一定程度上控制病毒，并不能有效的清除。究其原因是因为HIV-1可潜伏在细胞内形成HIV-1储藏库，常规药物不能影响这些储藏库，并且病人一旦停止治疗，它们会因为各种原因被激活，从而导致病情反复。综上所述，HIV-1储藏库的存在已成为HIV-1治愈的巨大障碍，如何有效的清除HIV-1储藏库是目前HIV-1领域的研究热点之一。当今的主流方法“hockandkill”是采用先激活后杀灭的思路。因此，研发安全、高效的HIV-1潜伏感染激活剂是当前亟待解决的问题之一。

单宁酸（TannicAcid），结构式为，在药典上又称鞣酸，属于水解类单宁，水解可得到棓酸和葡萄糖，是最早研究的单宁之一，具有很强的生物和药理活性，在医药、食品、日化等方面具有广泛的应用。现有研究未公开单宁酸具有激活HIV-1储藏库的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供单宁酸作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用。

实验数据显示，单宁酸具有良好的HIV-1潜伏激活能力。发明人采用本实验室构建的整合了表达GFP的全长HIV-1的Jurkat潜伏感染的细胞模型，通过高通量筛选含有1600种成药的成药库发现单宁酸能够有效地激活潜伏感染的HIV-1。进一步用多种J-Lat潜伏感染的细胞模型重复实验，发现单宁酸激活HIV-1潜伏感染的效果相对稳定。下一步我们将分别在人原代CD4+T细胞的HIV-1潜伏感染模型和病人的临床样本中分别验证单宁酸的激活效果。经实验证明，单宁酸在Jurkat细胞中的EC50为46.63μ6，具有较好的潜伏激活作用。单宁酸是已经在临床上使用的药物，其毒性较低，安全性好，但目前尚未有人报道其作为HIV-1潜伏感染激活剂的相关用途。本专利旨在为单宁酸作为HIV-1潜伏感染激活剂的进一步开发提供的强有力的理论基础和实践基础，证明其具有重要的研发价值和开发意义。

附图说明

图1：本实验室的JurkatHIV-1潜伏感染细胞系的激活效果及单宁酸在该细胞系中对HIV-1潜伏感染的激活情况，结果显示单宁酸在该系统中能够有效地激活潜伏的HIV-1。

图2：单宁酸在不同的HIV-1潜伏感染细胞系模型J-Lat8.4及J-Lat10.6中能够有效地激活HIV-1。

图3：使用目前常见的多种HIV-1潜伏感染的激活剂对比在它们各自在J-LatHIV-1潜伏感染细胞系中的激活效果。

图4：使用目前常见的多种HIV-1潜伏感染的激活剂对比在它们各自在J-LatHIV-1潜伏感染细胞系中的激活效果。

图5：单宁酸在J-LatHIV-1潜伏感染的细胞系中的EC50是46.63μg。

具体实施方式

下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。

实验一：JurkatHIV-1潜伏感染细胞系的构建及单宁酸在该系统中的激活效果。

1.实验方法：

1)取生长良好的人肾上细胞株239T细胞，接种于10cm平底板中。使用的培养基是完全培养基：高糖DMEM，10%胎牛血清以及1%双抗，培养条件是5%二氧化碳、37℃；

2)24h贴壁后，转染pNL4-3-转染件是培养基是完全培养基和VSV-G，如1）的条件继续培养；

3)48h后，收取上清，使用PEG-6000离心浓缩病毒颗粒，使用ELISAP24试剂盒检测病毒P24；

4)取生长良好的Jurkat细胞计数后，用3）中得到的病毒进行感染，病毒用量约为10ng/1g/到6细胞；（感染时使用促感染试剂polybrene）；

5)感染6h后换液，使用PBS清洗三次，弃上清，使用1640培养基（10%胎牛血清，1%双抗）培养，

6)培养4-5天后，使用流式分选仪分选GFP-细胞，继续使用1640培养基培养；