[发明专利]一种制备4-乙烯基愈创木酚的方法

权利要求书

1.一种制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将地衣芽孢杆菌71722接种到LB固体培养基上培养得到成熟的斜面培养物；再将斜面培养物接种到种子液培养基中，培养制得种子培养液；

2）按体积比10%的接种量将种子培养液接种到LB液体培养基中，在菌体量达到OD₆₀₀=2.0时，加终浓度5mM、pH7.0的阿魏酸诱导培养，在37℃条件下，200rpm振荡培养20h，得到的转化菌液；

3）取转化菌液，在6500rpm离心15min收集菌体1g湿重，并用M9转化培养基重悬清洗3次，得到转化细胞；

4）用M9转化培养基重悬转化细胞，同时加入阿魏酸以及加入总体积50%的有机溶剂，在37℃条件下，150rpm震荡培养，获得富含4-乙烯基愈创木酚的阿魏酸转化液。

2.根据权利要求1所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，步骤4）中，所述阿魏酸浓度为50~100mM。

3.根据权利要求1所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，步骤1）中，种子培养液的培养基配方为：酵母提取物5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；斜面培养使用的固体培养基是在种子培养液的培养基中添加质量体积比为1.6~2.0%的琼脂获得。

4.根据权利要求1所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，步骤3）中，M9转化培养基的配方是：磷酸氢二钠4.2mM，磷酸二氢钾2.2mM，氯化钠0.9mM，氯化铵1.9mM，自然pH7.2。

5.根据权利要求1所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，步骤4）中，震荡培养时间为4~72h。

6.根据权利要求1所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，采用高效液相色谱法检测4-乙烯基愈创木酚的浓度。

7.根据权利要求6所述的制备4-乙烯基愈创木酚的方法，其特征在于，高效液相色谱的流动相为35%甲醇：65%千分之一乙酸，高效液相色谱的检测条件为：柱温30℃，流速0.8mL/min，进样量5uL，阿魏酸和4-乙烯基愈创木酚的检测波长分别为320nm和255nm。