[发明专利]一种病毒灭活去除纯化乌司他丁的方法及提高乌司他丁稳定性的药物组合物

权利要求书

1.一种病毒灭活纯化乌司他丁的方法，该方法包括：将乌司他丁粗品通过层析、低温乙醇沉淀、低PH法结合切向流超滤、冻干步骤进行纯化，所得纯化后的乌司他丁的总收率提高到70%以上，总效价不低于5000iu/mg，柱效提升约50%，病毒去除率不低于4log。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乌司他丁粗品是通过以男性尿液为原料，将原料依次经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析制备得到的。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述工序包括如下步骤：

（1）用洗脱液A溶解乌司他丁粗品，搅拌、离心，留取离心液，所述洗脱液A为0.01-0.3mol/L的醋酸盐缓冲液；

（2）用洗脱液B平衡经特异性处理再生的吸附柱，将上述离心液上柱，洗脱液B为0.01-0.5mol/L醋酸钠和0.1-5mol/LNaCl的缓冲液；

（3）用洗脱液B洗脱吸附柱，收集洗脱液；

（4）用洗脱液C平衡亲和层析柱，将超滤液上柱，洗脱液C为0.01-0.5mol/L甘氨酸和0.1-5mol/LNaCl的缓冲液；

（5）上样结束后，用洗脱液C洗脱，收集洗脱液；

（6）柱中的亲和树脂经洗脱液C洗脱后，用洗脱液D洗涤去除吸附在上面的杂质，密封待用，洗脱液D为0.01-0.3mol/L盐酸和0.1-5mol/LNaCl的缓冲液；

（7）将洗脱液经超滤膜，加入磷酸盐缓冲液反复超滤，得超滤液；

（8）超滤液中加入低温乙醇沉淀，离心，固体再用无水乙醇脱水，离心，弃去上清液，留取沉淀物；

（9）沉淀物经低PH法处理后，切向流超滤；

（10）冻干，即得乌司他丁。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.5mol/L。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述吸附柱为阴离子交换柱，包括强阴离子交换柱Q-SephadexA-25,Q-SephadexA-50,Q-SephadexC-25,Q-SephadexC-50；弱阴离子交换柱DEAE-CelluloseDE-22，DEAE-CelluloseDE-23，DEAE-CelluloseDE-51，DEAE-CelluloseDE-52，DEAE-CelluloseDE-53。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的树脂再生法即一定次序的水洗、酸洗、碱洗处理，提高树脂柱的效率。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述亲和层析柱包括：CM-SephadexA-25,CM-SephadexA-50,CM-SephadexC-25,CM-SephadexC-50，SP-Sepharose2B,SP-Sepharose4B,SP-Sepharose6B，SP-SepharoseCL-2B,SP-SepharoseCL-4B,SP-SepharoseCL-6B。

8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：超滤液中加入低温乙醇沉淀，低PH法法结合切向流超滤处理进行病毒灭活去除，具体的说，选用-20℃以下、95%以上的乙醇，超滤膜选用截留孔径20nm的双层聚醚砜膜，低PH法处理条件选用pH3～6,18～25℃培育15～30天。

9.一种药物组合物，其含有根据权利要求1-8制备的乌司他丁作为活性成分,还含有甘露醇、氯化钠、磷酸缓冲液。