[发明专利]一种结核杆菌DNA的提取纯化方法在审
| 申请号： | 201510749457.7 | 申请日： | 2015-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN105219763A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 柳爱华;宝福凯;杨佳儒;徐翠平;赵华;陶律延;彭芸;麻明彪 | 申请（专利权）人： | 昆明医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/32 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650500 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 结核杆菌 dna 提取 纯化 方法 | ||
1.一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取结核杆菌的细菌悬液于试管中；
(2)用pH值8.0的0.01MEDTA洗涤细菌，离心后沉淀，弃上清液；
(3)向步骤(2)的沉淀中加入pH值为8.0的TES，5％(W/V)SDS，于35～40℃下溶解30～60min后沸水浴30～60min，再于冰上放置3～7min；
(4)向步骤(3)的产物中加入pH值4.8的NaAc和浓度为0.05mol/l的葡萄糖，颠倒混匀后冰上放置3～7min；
(5)向步骤(4)获得的试液中加入苯酚/氯仿/异戊醇(25：24：1)，颠倒混匀后于离心处理后沉淀，取上层水相；
(6)向步骤(5)中的上层水相中加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)，颠倒混匀并离心处理后沉淀，取上层水相；
(7)向步骤(6)中的上层水相中加入无水乙醇，充分震荡后离心处理后，在－5～－30℃下沉淀20～40min；
(8)取步骤(7)的沉淀物，晾干3-5分钟，加入TE缓冲液，得到结核杆菌DNA溶液。
2.根据权利要求1所述的一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于所述步骤(3)中的TES中含有浓度为18～23mg/ml溶菌酶。
3.根据权利要求1所述的一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于其中所述的离心处理的条件为12000r/min的10min离心。
4.根据权利要求1所述的一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于所述步骤(3)中处理条件为：于37℃下溶解40min后沸水浴40min，再于冰上放置5min。
5.根据权利要求1所述的一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于所述步骤(7)中处理条件为在－20℃下沉淀30min。
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