[发明专利]多倍体金线莲品种的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培育领域，具体而言，涉及多倍体金线莲品种的培育方法。

背景技术

金线莲是兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)的全草，别名金线兰、金丝草。是民间使用较广的一种传统珍贵药材，具有清热解毒、祛风利湿、滋阴润肺、降血压、平肝等功效。民间用于治疗肺结核、肺热咳嗽、风湿性关节炎、小儿惊风、跌打损伤、蛇伤等多种疾病，均有很好疗效。其株型小巧，叶型美观，叶脉金黄色网状排列，具有极高的观赏价值。近年来，金线莲用于治疗高血压、糖尿病及肿瘤等疑难病症方面，日益引起医药界的重视。民间称其为“神药，台湾称为“药王”。目前金线莲在台湾和东南亚地区的需求量很大，它在国内市场的售价已达2000元人民币/kg。

由于金线莲对生态环境要求严格，自然繁殖和生长缓慢，加上人类大量采集，药源濒于枯竭，人工种植成为发展金线莲产业的必然选择。但是，采用种子直播、分根繁殖、扦插繁殖等需时较长，繁殖倍率不高；金线莲株型小，导致种植者的效益不够显著。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供多倍体金线莲品种的培育方法，该方法采用安磺灵对金线莲的原球茎进行处理，使其染色体加倍，安全性高；得到的多倍体金线莲植株比二倍体亲本成倍增大，茎秆粗壮，叶片厚实，并且根、茎、叶的有效成分明显高于二倍体亲本。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子培养得到原球茎；

(b)、将所述原球茎浸泡在5-15μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理10-36h；

(c)、浸泡后的原球茎继续培养，得到丛生芽；

(d)、所述丛生芽分株后转入生根培养基中培养得到根茎叶完整的组培苗；

(e)、所述组培苗经筛选得到多倍体植株。

本发明提供的多倍体金线莲品种的培育方法，选用金线莲原球茎作为诱导材料，原球茎具有很强的分生能力，安磺灵溶液可抑制细胞有丝分裂，使细胞中的染色体加倍；本发明以特定浓度的安磺灵溶液对原球茎浸泡特定的时间，经过培养后得到的植株中，筛选即可得到多倍体金线莲植株，经大量试验验证，诱导率在43.2％-44.8％之间，得到的多倍体金线莲植株性状优良。

另外，本发明特定选用安磺灵，安磺灵毒性小，且性质稳定；而秋水仙素作为常用的染色体加倍剂，有剧毒，对操作人员容易造成伤害。

优选地，步骤(e)中，通过染色体检测筛选出多倍体植株。

优选地，在步骤(a)和步骤(c)中，所述培养均采用第一培养基进行；

所述第一培养基为：MS培养基中含有BA0.8-1.2mg/L、KT0.7-1.2mg/L、NAA0.05-0.15mg/L、蔗糖20-35g/L、琼脂4.5-8g/L、香蕉17-25g/L。

第一培养基营养丰富，利于金线莲种子及其原球茎的生长。

更优选地，所述第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、香蕉20g/L。

为了培养得到的原球茎处于更好的状态，提高诱导染色体加倍的效果，优选地，在步骤(a)中，所述培养的时间为27-40天，优选为28-32天。

为了达到更好的诱导效果，进一步地，在步骤(b)中，所述安磺灵溶液的浓度为8-10μmol/L，浸泡处理15-30h。

为了提高生根率，优选地，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.4-0.8mg/L、活性炭0.4-0.6g/L、香蕉18-25g/L。

更优选地，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L。

进一步地，在步骤(d)中，生根培养基中培养的时间为38-45天，得到完整的植株。

进一步地，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行。

优选地，步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为1500-2000xl，光照时间为9-12h/天。

优选地，在步骤(b)中，所述原球茎在浸泡安磺灵溶液之前，先进行暗培养3-5天。通过暗培养增大细胞的通透性，使诱导剂更容易渗透到细胞里面，提高诱导率。

另外，本发明中的MS培养基的配方如表1所示。

表1MS培养基具体成分